Abstrakt
Syftet med denna studie var att bestämma effekten av azitromycin på LPS-inducerad graviditetsförlust. Trettiosex gravida Wistar-honråttor uppdelades i fyra lika stora grupper enligt följande: kontrollgrupp, där 0,3 ml normal saltlösning administrerades intravenöst på dag 10 av graviditeten; azitromycin-grupp, där azitromycin administrerades oralt vid 350 mg kg − 1 dag på dagarna 9, 10 och 11 av graviditeten; lipopolysackaridgrupp, där LPS administrerades intravenöst via svansvenen vid 160 μg kg -1 på graviditetens dag 10; och azitromycin + LPS-gruppen, där azitromycin administrerades oralt vid 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 och 11 av graviditeten och LPS administrerades intravenöst vid 160 µg kg − 1 på dag 10 av graviditeten. Blodprover erhölls från svansvenen dag 10 i experimentet. Graviditetsgraden bestämdes. Tumörnekrosfaktor-alfa (TNF-α) och interleukin (IL-10) mättes med ELISA. Azitromycin förhindrade () LPS-inducerad graviditetsförlust. Högre TNF-a- och IL-10-nivåer mättes () i LPS- respektive azitromycin + LPS-grupperna. Sammanfattningsvis kan azitromycin vara användbart vid infektions- eller endotoxemiberoende graviditetsförlust.
1. Inledning
Moderns immunsystem kan känna igen och vägra ett svar mot fostrets antigener. Ett av de vanligaste ogynnsamma resultaten under graviditetens första trimester är spontan abort. Andelen spontanabort är 15% –20% hos kvinnor. De mekanismer som ligger till grund för graviditetsförlust orsakade av moderinfektioner är dock inte tydliga.
Lipopolysackarid (LPS), ett endotoxin härrörande från gramnegativa bakterier, har använts för att utgöra inflammatoriskt svar i experimentella studier med graviditet. Det är välkänt som en utlösare för abort och för tidig födsel via proinflammatoriska cytokiner och kväveoxid. Den dominerande produktionen av T-hjälpar (Th2) -cytokiner är ett kännetecken för normal graviditet, medan en dominerande produktion av Th1-cytokiner är ett kännetecken för abort och återkommande abort. En förändring från en Th2-förspänd till en Th1-förspänd cytokinprofil i moderns serum resulterar i komplikationer för gravida kvinnor, såsom spontana aborter och preeklampsi.
Förutom den direkta antimikrobiella effekten uppvisar makrolider också antiinflammatorisk egenskaper . Azitromycin har liknande effekt jämfört med erytromycin eller amoxicillin; azitromycin har också färre biverkningar vid behandling av gravida kvinnor med Chlamydia trachomatis-infektioner. På grund av denna funktion ökar användning av azitromycin för att behandla gravida kvinnor med okomplicerade C. trachomatis-infektioner bland förlossningsläkare. Azitromycin är kliniskt effektivt vid behandling av vanliga luftvägsinfektioner, hud / hudstrukturinfektioner, nongonokock uretrit och cervicit på grund av C. trachomatis. Azitromycin kategoriseras som ett läkemedel av klass B under graviditet.
Balansen mellan tumörnekrosfaktor-alfa (TNF-a) och interleukin (IL-10) bestäms för graviditetsframgång. Närhelst nivån av TNF-α ökar sker abort medan IL-10 stöder graviditeten. På grund av att det inte finns en adekvat förebyggande behandling av tidig graviditetsförlust har det antagits att azitromycin kan förhindra LPS-inducerad graviditetsförlust på grund av en hämmande effekt på TNF-a och potentierande effekt på IL-10.
Syftet med denna studie var att bestämma effekten av azitromycin på LPS-inducerad dräktighetsförlust hos råttor.
2. Material och metoder
2.1. Djur
Studieprotokollet godkändes av den etiska kommittén vid Necmettin Erbakan University, Experimental Medicine, Research and Application Center, Konya, Turkiet. Trettiosex hon- och 9 Wistar-hanråttor (g respektive g, 5-6 månader gamla) användes i denna studie. Råttor matades med en standardpelleterad diet och kranvatten tillhandahölls ad libitum som dricksvatten. Djur föddes upp i standardburar i en 12 timmars ljus / mörk cykel vid rumstemperatur i en luftfuktighetskontrollerad miljö.
2.2. Experimentellt förfarande
LPS (Escherichia coli, serotyp O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Tyskland) och azitromycin (Zitromax, 200 mg / 5 ml, oral suspension, Pfizer, Istanbul, Turkiet) späddes ut med pyrogenfri saltlösning till lämpliga koncentrationer.
Honråttor burades med män i 1 dag och närvaron av en vaginal plugg betecknades som dag 0 av dräktigheten. Den tionde till den 12: e dagen i en råttas graviditet motsvarar ungefär den första trimestern av graviditet hos människor. Gravida råttor delades slumpmässigt upp i fyra grupper enligt följande: kontrollgrupp, där 0.3 ml normal saltlösning administrerades intravenöst på dag 10 av graviditeten (); azitromycin-grupp, där azitromycin administrerades oralt vid 350 mg kg − 1 dag på dagarna 9, 10 och 11 av graviditeten (); där LPS-gruppen administrerades LPS intravenöst via svansvenen vid 160 μg kg − 1 på graviditetens dag 10 (); och azitromycin + LPS-gruppen, där azitromycin administrerades oralt vid 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 och 11 av graviditeten och LPS administrerades intravenöst vid 160 μg kg − 1 på dag 10 av graviditeten (). Blodprover erhölls från svansvenen dag 10 i experimentet (3 timmar efter LPS-administrering) och alla djur följdes under dräktighet. Dessutom bestämdes djur som föddes och inte föddes. I slutet av studien avlivades alla djur under tiopental natriumanestesi (70 mg / kg, intraperitonealt; Pental Sodium 1 g inj., I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istanbul, Turkiet).
2.3. Mätningar
Prover centrifugerades och serumprover lagrades vid -70 ° C fram till analys. TNF-α (eBioscience Rat TNF-α-kit, känslighet 11 pg / ml, San Diego, CA, USA) och IL-10 (eBioscience Rat IL-10kit, känslighet 1,5 pg / ml, San Diego, CA, USA) var bestämdes vid 450 nm med kommersiella ELISA-kit med ELISA-läsare (MWGt Lambda Scan 200, USA).
2.4. Statistisk analys
Graviditetsgraden för grupperna utvärderades med hjälp av ett chi-kvadrat-test och koncentrationerna av TNF-a och IL-10 jämfördes med ANOVA och Tukey-testet. Data uttrycks som medelvärdet ± SE. Antalet avkommor i varje grupp utvärderades med ANOVA- och Duncan-test. Betydelse accepterades på nivån.
3. Resultat
Alla djur följdes under dräktighet. Råttornas genomsnittliga vikt var g före graviditet och g i slutet av dräktigheten. Azitromycin hämmade () LPS-inducerad graviditetsförlust, och det fanns inga negativa effekter på graviditetsgraden (Tabell 1). TNF-a-nivån var högre () i LPS-gruppen, och IL-10-nivåerna var lägre () i azitromycin- och kontrollgrupperna (tabell 2). Dessutom var koncentrationen av IL-10 i azitromycin + LPS-gruppen signifikant högre () än de andra grupperna (tabell 2). Avkomma var statistiskt signifikant () i LPS-gruppen jämfört med alla andra grupper (figur 1).
|
||||||||||||||||||||||||
| LPS: lipopolysackarid (160 µg kg− 1 intravenöst, Escherichia coli 0111: B4). a, b Olika bokstäver i samma kolumn är statistiskt signifikanta (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Kommentar
Syftet med denna studie var att bestämma effekten av azitromycin på septisk abort. Många endogena medel, såsom prostaglandiner eller cytokiner, spelar en central roll under graviditeten. Återkommande spontan abort definieras klassiskt som tre eller fler graviditetsförluster och inträffar vanligtvis före 20 veckors graviditet. Nyligen har återkommande spontan abort omdefinierats som spontan förlust av två eller flera kliniska graviditeter. Negativa graviditetsresultat, såsom spontan abort, för tidigt arbete, preeklampsi och intrauterin tillväxtbegränsning, kan bero på en avreglering av cytokinnätverk.
I den aktuella studien uppvisade azitromycin inte enbart en negativ effekt på graviditet (tabell 1). Det har rapporterats att den profylaktiska användningen av azitromycin kan minska procedurrelaterad graviditetsförlust och kan vara säker hos gravida kvinnor.
I den aktuella studien bestämdes högre graviditetsnivåer i kontroll- och azitromycingrupperna än i LPS-gruppen (tabell 1). Dessutom mättes en högre TNF-α-nivå i LPS-gruppen (tabell 2).Moderns immunsvar bestäms för graviditetsframgång. Djurmodeller har använts för att belysa denna fråga. Mekanismen bakom tidig graviditetsförlust är associerad med flera inflammatoriska molekyler; sålunda är modulering av inflammatoriska moduler användbar. Överdriven inflammation kan leda till ogynnsamma resultat, såsom spontan abort och fosterresorption. Implantationsområden är extremt känsliga för LPS- och Th1-cytokiner (TNF-α och lL-2) under tidig graviditet hos möss. Dessa molekyler har förmågan att inducera embryonresorption. Låga doser av LPS, utan att påverka moderns överlevnad, orsakar höga embryonresorption under tidig graviditet. Avreglering av cytokinnätverk resulterar i negativa graviditetsresultat. Th2-cytokiner, inklusive IL-10, har en skyddande roll, medan Th1-cytokiner, inklusive TNF-a, är abortfaktorer under graviditet. Ökade TNF-α-nivåer orsakade av LPS resulterade i otillräcklig placentaperfusion, förbättring av trombotiska händelser och placenta och fostrets hypoxi. I den aktuella studien ökade LPS-behandlingen TNF-α-nivån, vilket bestämde en minskning av graviditetsfrekvensen. Det har rapporterats att den LPS-ökade TNF-α-nivån är nära kopplad till återkommande graviditetsförlust. I en annan studie ökade koncentrationen av LPS-bindande protein i fostervatten hos patienter som hade en spontan fosterförlust.
I den aktuella studien ökade azitromycin graviditetshastigheten 3,5 gånger jämfört med LPS grupp (tabell 1). Dessutom inträffade en högre IL-10-koncentration () i azitromycin + LPS-gruppen än de för de andra grupperna, och TNF-a-nivån var lägre () i azitromycin + LPS-gruppen än LPS-gruppen (Tabell 2). Erytromycin och azitromycin används vid behandling av endocervikal klamydialinfektion och mycoplasma-lunginflammation hos obstetriska patienter. Azitromycin kan vara mer effektivt mot endometriinfektioner eftersom det ger viktiga vävnadsnivåer under en lång period. Transplacental passage av azitromycin är begränsad och azitromycin och andra makrolidantibiotika är allmänt accepterade att vara säkra under graviditet. Ökade graviditetshastigheter i azitromycin + LPS-gruppen (tabell 1) kan återspegla den depressiva effekten av makrolider på proinflammatorisk cytokinproduktion och den potentierande effekten på IL-10-nivån. De undertryckande effekterna av makrolider, inklusive azitromycin, på TNF-a-nivån och de potentierande effekterna av dessa läkemedel på IL-10-nivån har rapporterats. Dessutom förhindrar IL-10-injektioner LPS-inducerad abort och minskar LPS-inducerad fosterdöd.
Sammanfattningsvis kan infektions- eller endotoxemi-medierad graviditetsförlust förhindras genom användning av azitromycin under graviditetsperioden.
Intressekonflikt
Författaren förklarar att det finns ingen intressekonflikt.
Bekräftelser
Författaren tackar Dr. Enver YAZAR och Dr. Ibrahim AYDIN för det vetenskapliga stödet.