Azitromicina previne pierderea sarcinii: reducerea nivelului factorului de necroză tumorală-alfa și creșterea nivelului de interleukină-10 la șobolani

Rezumat

Scopul acestui studiu a fost determinarea efectul azitromicinei asupra pierderii sarcinii induse de LPS. Treizeci și șase șobolani femele Wistar însărcinate au fost împărțite în 4 grupe egale după cum urmează: grupul martor, unde 0,3 ml soluție salină normală au fost administrate intravenos în ziua 10 a sarcinii; grupul azitromicină, în care azitromicina a fost administrată oral la 350 mg kg-1 zi în zilele 9, 10 și 11 de sarcină; grupul lipopolizaharidic, în care LPS a fost administrat intravenos prin vena cozii la 160 μg kg − 1 în ziua 10 a sarcinii; și grupul azitromicină + LPS, unde azitromicina a fost administrată oral la 350 mg kg-1 zi în zilele 9, 10 și 11 de sarcină și LPS a fost administrat intravenos la 160 μg kg -1 în ziua 10 a sarcinii. Probele de sânge au fost obținute din vena cozii în ziua 10 a experimentului. Au fost determinate ratele de sarcină. Nivelurile factorului de necroză tumorală-alfa (TNF-α) și nivelurile de interleukină (IL-10) au fost măsurate prin ELISA. Azitromicina a prevenit () pierderea sarcinii indusă de LPS. Au fost măsurate niveluri mai ridicate de TNF-α și IL-10 () în grupurile LPS și respectiv azitromicină + LPS. În concluzie, azitromicina poate fi utilă în pierderea sarcinii dependentă de infecție sau endotoxemie.

1. Introducere

Sistemul imunitar matern este capabil să recunoască și să refuze un răspuns împotriva antigenelor fetale. Unul dintre cele mai frecvente rezultate nefavorabile în primul trimestru de sarcină este avortul spontan; rata avortului spontan este de 15% –20% la femei. Cu toate acestea, mecanismele care stau la baza pierderii sarcinii cauzate de infecțiile materne nu sunt clare.

Lipopolizaharida (LPS), o endotoxină derivată din bacterii gram negative, a fost utilizată pentru a constitui răspuns inflamator în studiile experimentale cu sarcină. Este bine cunoscut ca factor declanșator al avortului și al nașterii premature prin intermediul citokinelor proinflamatorii și a oxidului nitric. Producția predominantă de citokine T-helper (Th2) este o caracteristică a sarcinii normale, în timp ce o producție predominantă de citokine Th1 este o caracteristică a avortului și a avortului recurent. O schimbare de la un profil de citokină Th2 cu un prejudiciu Th1 în serul matern duce la complicații pentru femeile gravide, cum ar fi avorturi spontane și preeclampsie.

Pe lângă efectul antimicrobian direct, macrolidele prezintă și antiinflamatoare proprietăți. Azitromicina are o eficacitate similară în comparație cu eritromicina sau amoxicilina; azitromicina are, de asemenea, mai puține efecte adverse în tratamentul femeilor însărcinate cu infecții cu Chlamydia trachomatis. Datorită acestei caracteristici, utilizarea azitromicinei pentru tratarea femeilor însărcinate cu infecții necomplicate cu C. trachomatis crește în rândul obstetricienilor. Azitromicina este eficientă din punct de vedere clinic în tratamentul infecțiilor respiratorii comune, ale pielii / structurii pielii, ale uretritei nongonococice și cervicitei datorate C. trachomatis. Azitromicina este clasificată ca medicament de clasa B în timpul sarcinii.

Echilibrul dintre factorul de necroză tumorală-alfa (TNF-α) și interleukină (IL-10) este determinat pentru succesul sarcinii. Ori de câte ori crește nivelul de TNF-α, are loc avortul, în timp ce IL-10 susține sarcina. Datorită inexistenței unui tratament preventiv adecvat al pierderii precoce a sarcinii, s-a emis ipoteza că azitromicina poate preveni pierderea sarcinii indusă de LPS din cauza unui efect inhibitor asupra TNF-α și a unui efect potențator asupra IL-10.

Scopul acestui studiu a fost de a determina efectul azitromicinei asupra pierderii sarcinii induse de LPS la șobolani.

2. Materiale și metode

2.1. Animal

Protocolul de studiu a fost aprobat de Comitetul Etic al Universității Necmettin Erbakan, Centrul de Medicină Experimentală, Cercetare și Aplicare, Konya, Turcia. În acest studiu au fost folosiți 36 de șobolani Wistar femele și 9 masculi (respectiv g și g, cu vârsta de 5-6 luni). Șobolanii au fost hrăniți cu o dietă standard cu pelete și apa de la robinet a fost furnizată ad libitum ca apă potabilă. Animalele au fost crescute în cuști standard pe un ciclu de lumină / întuneric de 12 ore la temperatura camerei într-un mediu controlat de umiditate.

2.2. Procedura experimentală

LPS (Escherichia coli, serotip O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Germania) și azitromicină (Zitromax, 200 mg / 5 ml, suspensie orală, Pfizer, Istanbul, Turcia) au fost diluate cu ser fiziologic fără pirogen la concentrații adecvate.

Șobolanii femele au fost în cuști cu bărbați timp de 1 zi, iar prezența unui dop vaginal a fost desemnată ca ziua 0 a sarcinii. A zecea până la a 12-a zi a sarcinii unui șobolan corespunde aproximativ primului trimestru de sarcină umană. Șobolanii gravide au fost împărțiți în mod aleatoriu în 4 grupe după cum urmează: grupul de control, unde 0.3 mL de soluție salină normală au fost administrate intravenos în ziua 10 a sarcinii (); grupul azitromicină, în care azitromicina a fost administrată oral la 350 mg kg-1 zi în zilele 9, 10 și 11 de sarcină (); unde grupul LPS, LPS a fost administrat intravenos prin vena cozii la 160 μg kg − 1 în ziua 10 a sarcinii (); și grupul azitromicină + LPS, în care azitromicina a fost administrată oral la 350 mg kg-1 zi în zilele 9, 10 și 11 de sarcină și LPS a fost administrat intravenos la 160 μg kg − 1 în ziua 10 a sarcinii (). Probele de sânge au fost obținute din vena cozii în ziua 10 a experimentului (3 ore după administrarea LPS) și toate animalele au fost urmărite în timpul sarcinii. În plus, animalele care au născut și nu au născut au fost determinate. La sfârșitul studiului, toate animalele au fost eutanasiate sub anestezie tiopentală de sodiu (70 mg / kg, intraperitoneal; sodiu Pental 1 g inj., I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istanbul, Turcia).

2.3. Măsurători

Probele au fost centrifugate și probele de ser au fost depozitate la -70 ° C până la analiză. Nivelurile de TNF-α (kitul TNF-α eBioscience Rat, sensibilitate 11 pg / ml, San Diego, CA, SUA) și IL-10 (kitul IL-10 eBioscience Rat, sensibilitate 1,5 pg / ml, San Diego, CA, SUA) au fost determinat la 450 nm de kituri comerciale ELISA cu cititor ELISA (MWGt Lambda Scan 200, SUA).

2.4. Analiză statistică

Ratele de sarcină ale grupurilor au fost evaluate folosind un test chi-pătrat, iar concentrațiile de TNF-α și IL-10 au fost comparate cu ANOVA și testul Tukey. Datele sunt exprimate ca medie ± SE. Numărul descendenților din fiecare grup a fost evaluat prin testul ANOVA și Duncan. Semnificația a fost acceptată la nivel.

3. Rezultate

Toate animalele au fost urmărite în timpul sarcinii. Greutatea medie a șobolanilor a fost g înainte de sarcină și g la sfârșitul sarcinii. Azitromicina a inhibat () pierderea sarcinii indusă de LPS și nu au existat efecte adverse asupra ratei sarcinii (Tabelul 1). Nivelul TNF-α a fost mai mare () în grupul LPS, iar nivelurile IL-10 au fost mai mici () în grupurile de azitromicină și martor (Tabelul 2). În plus, concentrația IL-10 în grupul azitromicină + LPS a fost semnificativ mai mare () decât celelalte grupuri (Tabelul 2). Rata descendenților a fost semnificativă statistic () în grupul LPS în comparație cu toate celelalte grupuri (Figura 1).

Figura 1

Numărul de descendenți din grupuri. Pentru a induce pierderea sarcinii cu LPS, 160 μg kg − 1 LPS (Escherichia coli 0111: B4) a fost administrat intravenos prin vena cozii în ziua 10 de sarcină în grupul LPS. Azitromicina a fost administrată pe cale orală la 350 mg kg-1 zi în zilele 9, 10 și 11 de sarcină în grupurile de azitromicină și azitromicină + LPS. Probele de sânge au fost obținute din vena cozii în ziua 10 a experimentului și toate animalele au fost urmărite în timpul sarcinii. Animalele care au născut și nu au născut au fost determinate. Diferite litere sunt semnificative statistic ().

4. Comentariu

Scopul acestui studiu a fost de a determina efectul azitromicinei asupra avortului septic. Mulți agenți endogeni, cum ar fi prostaglandinele sau citokinele, joacă un rol esențial în timpul sarcinii. Avortul spontan recurent este definit în mod clasic ca trei sau mai multe pierderi de sarcină și apare de obicei înainte de 20 de săptămâni de gestație. Recent, avortul spontan recurent a fost redefinit ca pierderea spontană a două sau mai multe sarcini clinice. Rezultatele negative ale sarcinii, cum ar fi avortul spontan, travaliul prematur, preeclampsia și restricția de creștere intrauterină, pot rezulta dintr-o dereglare a rețelelor de citokine.

În studiul actual, azitromicina singură nu a prezentat un efect negativ asupra rata sarcinii (Tabelul 1). S-a raportat că utilizarea profilactică a azitromicinei poate reduce pierderea sarcinii legată de procedură și poate fi sigură la femeile însărcinate. grupul LPS (Tabelul 1). În plus, a fost măsurat un nivel mai ridicat de TNF-α în grupul LPS (Tabelul 2).Răspunsul imun matern este determinat pentru succesul sarcinii. Modele animale au fost folosite pentru a elucida această întrebare. Mecanismul care stă la baza pierderii precoce a sarcinii este asociat cu mai multe molecule inflamatorii; astfel, modularea modulelor inflamatorii este utilă. Inflamația excesivă poate duce la rezultate nefavorabile, cum ar fi avortul spontan și resorbția fetală. Zonele de implantare sunt extrem de sensibile la citokinele LPS și Th1 (TNF-α și lL-2) în timpul sarcinii timpurii la șoareci. Aceste molecule au capacitatea de a induce resorbția embrionară. Dozele mici de LPS, fără a afecta supraviețuirea mamei, determină rate ridicate de resorbție embrionară în timpul sarcinii timpurii. Dereglarea rețelelor de citokine are ca rezultat rezultate adverse ale sarcinii. Citokinele Th2, inclusiv IL-10, au un rol protector, în timp ce citokinele Th1, inclusiv TNF-α, sunt factori abortivi în timpul sarcinii. Nivelurile crescute de TNF-α cauzate de LPS au dus la perfuzie placentară insuficientă, îmbunătățirea evenimentelor trombotice și hipoxie placentară și fetală. În studiul actual, tratamentul cu LPS a crescut nivelul TNF-α, ceea ce a determinat o scădere a ratei sarcinii. S-a raportat că nivelul TNF-a crescut cu LPS este strâns legat de pierderea recurentă a sarcinii. Într-un alt studiu, concentrația proteinei care leagă LPS în lichidul amniotic a fost crescută la pacienții care au avut o pierdere fetală spontană.

În studiul actual, azitromicina a crescut rata de sarcină de 3,5 ori în comparație cu LPS grup (Tabelul 1). În plus, a apărut o concentrație mai mare de IL-10 () în grupul azitromicină + LPS decât cele ale celorlalte grupuri, iar nivelul TNF-α a fost mai mic () în grupul azitromicină + LPS decât grupul LPS (Tabelul 2). Eritromicina și azitromicina sunt utilizate în tratamentul infecțiilor cu chlamidie endocervicale și a pneumoniei cu micoplasmă la pacienții obstetrici. Azitromicina poate fi mai eficientă împotriva infecțiilor endometriale, deoarece oferă niveluri importante de țesuturi pentru o perioadă lungă de timp. Trecerea transplacentară a azitromicinei este limitată, iar azitromicina și alte antibiotice macrolide sunt, în general, acceptate ca fiind sigure în timpul sarcinii. Rata crescută a sarcinii în grupul cu azitromicină + LPS (Tabelul 1) poate reflecta efectul depresiv al macrolidelor asupra producției de citokine proinflamatorii și efectul potențator asupra nivelului IL-10. Au fost raportate efectele supresive ale macrolidelor, inclusiv azitromicina, asupra nivelului TNF-α și efectele potențatoare ale acestor medicamente asupra nivelului IL-10. Mai mult, injecțiile cu IL-10 previn avorturile induse de LPS și scad moartea fetală indusă de LPS.

În concluzie, pierderea sarcinii mediată de infecție sau endotoxemie poate fi prevenită prin utilizarea azitromicinei în timpul perioadei de sarcină.

Conflict de interese

Autorul declară că nu există conflict de interese.

Mulțumiri

Autorul le mulțumește Dr. Enver YAZAR și Dr. Ibrahim AYDIN pentru asistența științifică.