Resumo
O objetivo deste estudo foi determinar o efeito da azitromicina na perda de gravidez induzida por LPS. Trinta e seis ratas Wistar grávidas foram divididas em 4 grupos iguais da seguinte forma: grupo controle, onde 0,3 mL de solução salina normal foi administrado por via intravenosa no 10º dia de gestação; grupo azitromicina, em que a azitromicina foi administrada por via oral na dose de 350 mg kg − 1 dia nos dias 9, 10 e 11 de gravidez; grupo lipopolissacarídeo, onde o LPS foi administrado por via intravenosa pela veia da cauda a 160 μg kg − 1 no dia 10 de gravidez; e o grupo azitromicina + LPS, onde azitromicina foi administrada por via oral na dose de 350 mg kg − 1 dia nos dias 9, 10 e 11 de gravidez e LPS foi administrado por via intravenosa a 160 μg kg − 1 no dia 10 de gravidez. Amostras de sangue foram obtidas da veia da cauda no dia 10 do experimento. As taxas de gravidez foram determinadas. Os níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina (IL-10) foram medidos por ELISA. A azitromicina preveniu () a perda de gravidez induzida por LPS. Níveis mais elevados de TNF-α e IL-10 foram medidos () nos grupos LPS e azitromicina + LPS, respectivamente. Em conclusão, a azitromicina pode ser útil na perda de gravidez dependente de infecção ou endotoxemia.
1. Introdução
O sistema imunológico materno é capaz de reconhecer e recusar uma resposta contra antígenos fetais. Um dos resultados desfavoráveis mais comuns durante o primeiro trimestre da gravidez é o aborto espontâneo; a taxa de aborto espontâneo é de 15% a 20% nas mulheres. No entanto, os mecanismos subjacentes à perda de gravidez causada por infecções maternas não são claros.
O lipopolissacarídeo (LPS), uma endotoxina derivada de bactérias gram negativas, tem sido usado para constituir resposta inflamatória em estudos experimentais com gravidez. É bem conhecido como desencadeador de aborto e parto prematuro via citocinas pró-inflamatórias e óxido nítrico. A produção predominante de citocinas T auxiliares (Th2) é uma característica da gravidez normal, enquanto a produção predominante de citocinas Th1 é uma característica do aborto e aborto recorrente. Uma mudança de um perfil de citocinas com tendência Th2 para Th1 no soro materno resulta em complicações para mulheres grávidas, como abortos espontâneos e pré-eclâmpsia.
Além do efeito antimicrobiano direto, os macrolídeos também apresentam efeitos antiinflamatórios propriedades. A azitromicina tem eficácia semelhante em comparação com a eritromicina ou amoxicilina; A azitromicina também tem menos efeitos adversos no tratamento de mulheres grávidas com infecções por Chlamydia trachomatis. Por causa dessa característica, o uso de azitromicina para tratar mulheres grávidas com infecções não complicadas por C. trachomatis está aumentando entre os obstetras. A azitromicina é clinicamente eficaz no tratamento de infecções respiratórias comuns, infecções da pele / estrutura da pele, uretrite não gonocócica e cervicite por C. trachomatis. A azitromicina é categorizada como uma droga de classe B durante a gravidez.
O equilíbrio entre o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e a interleucina (IL-10) é determinado para o sucesso da gravidez. Sempre que o nível de TNF-α aumenta, ocorre o aborto, enquanto a IL-10 sustenta a gravidez. Devido à inexistência de um tratamento preventivo adequado para a perda de gravidez precoce, foi levantada a hipótese de que a azitromicina pode prevenir a perda de gravidez induzida por LPS devido a um efeito inibitório sobre TNF-α e efeito potencializador de IL-10.
O objetivo deste estudo foi determinar o efeito da azitromicina na perda de gravidez induzida por LPS em ratos.
2. Materiais e métodos
2.1. Animal
O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Necmettin Erbakan, Medicina Experimental, Centro de Pesquisa e Aplicação, Konya, Turquia. Trinta e seis ratos Wistar fêmeas e 9 machos (geg, respectivamente, 5-6 meses de idade) foram usados neste estudo. Os ratos foram alimentados com uma dieta granulada padrão e água da torneira foi fornecida ad libitum como água para beber. Os animais foram criados em gaiolas padrão em um ciclo claro / escuro de 12 horas em temperatura ambiente em um ambiente com umidade controlada.
2.2. Procedimento Experimental
LPS (Escherichia coli, serótipo O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Alemanha) e azitromicina (Zitromax, 200 mg / 5 mL, suspensão oral, Pfizer, Istambul, Turquia) foram diluídos com solução salina apirogênica em concentrações apropriadas.
Ratas foram enjauladas com machos por 1 dia e a presença de um tampão vaginal foi designada como dia 0 de gravidez. O décimo ao 12º dia na gravidez de um rato corresponde aproximadamente ao primeiro trimestre da gravidez humana. As ratas grávidas foram divididas aleatoriamente em 4 grupos da seguinte forma: grupo controle, onde 0.3 mL de solução salina normal foram administrados por via intravenosa no 10º dia de gestação (); grupo azitromicina, onde a azitromicina foi administrada por via oral na dose de 350 mg kg − 1 dia nos dias 9, 10 e 11 de gravidez (); no grupo LPS, o LPS foi administrado por via intravenosa através da veia da cauda a 160 μg kg − 1 no dia 10 de gravidez (); e o grupo azitromicina + LPS, onde a azitromicina foi administrada por via oral a 350 mg kg − 1 dia nos dias 9, 10 e 11 de gravidez e LPS foi administrado por via intravenosa a 160 μg kg − 1 no dia 10 de gravidez (). Amostras de sangue foram obtidas da veia da cauda no dia 10 do experimento (3 horas após a administração de LPS) e todos os animais foram acompanhados durante a gravidez. Além disso, foram determinados os animais que deram à luz e os que não deram à luz. No final do estudo, todos os animais foram sacrificados sob anestesia tiopental sódica (70 mg / kg, intraperitonealmente; Pental Sódio 1 g inj., I.E. Ulagay Ilac Sanayi, Istambul, Turquia).
2.3. Medições
As amostras foram centrifugadas e as amostras de soro armazenadas a -70 ° C até a análise. Os níveis de TNF-α (eBioscience Rat TNF-α kit, sensibilidade 11 pg / mL, San Diego, CA, EUA) e IL-10 (eBioscience Rat IL-10kit, sensibilidade 1,5 pg / mL, San Diego, CA, EUA) foram determinado a 450 nm por kits comerciais de ELISA com leitor de ELISA (MWGt Lambda Scan 200, EUA).
2.4. Análise estatística
As taxas de gravidez dos grupos foram avaliadas pelo teste do qui-quadrado e as concentrações de TNF-α e IL-10 foram comparadas com ANOVA e o teste de Tukey. Os dados são expressos como a média ± SE. O número de descendentes em cada grupo foi avaliado por ANOVA e teste de Duncan. A significância foi aceita no nível.
3. Resultados
Todos os animais foram acompanhados durante a gravidez. O peso médio das ratas era g antes da gravidez eg no final da gravidez. A azitromicina inibiu () a perda de gravidez induzida por LPS e não houve efeitos adversos na taxa de gravidez (Tabela 1). O nível de TNF-α foi maior () no grupo LPS e os de IL-10 foram menores () nos grupos azitromicina e controle (Tabela 2). Além disso, a concentração de IL-10 no grupo azitromicina + LPS foi significativamente maior () do que nos outros grupos (Tabela 2). A taxa de descendência foi estatisticamente significativa () no grupo LPS quando comparado a todos os outros grupos (Figura 1).
|
||||||||||||||||||||||||
| LPS: lipopolissacarídeo (160 µg kg− 1 por via intravenosa, Escherichia coli 0111: B4). a, bAs letras diferentes na mesma coluna são estatisticamente significativas (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Comentário
O objetivo deste estudo foi determinar o efeito da azitromicina no aborto séptico. Muitos agentes endógenos, como prostaglandinas ou citocinas, desempenham um papel fundamental durante a gravidez. O aborto espontâneo recorrente é classicamente definido como três ou mais perdas de gravidez e geralmente ocorre antes das 20 semanas de gestação. Recentemente, o aborto espontâneo recorrente foi redefinido como a perda espontânea de duas ou mais gestações clínicas. Resultados adversos da gravidez, como aborto espontâneo, trabalho de parto prematuro, pré-eclâmpsia e restrição do crescimento intrauterino, podem resultar de uma desregulação das redes de citocinas.
No estudo atual, a azitromicina sozinha não apresentou um efeito negativo no taxa de gravidez (Tabela 1). Foi relatado que o uso profilático de azitromicina pode diminuir a perda de gravidez relacionada ao procedimento e pode ser seguro em mulheres grávidas.
No estudo atual, taxas de gravidez mais altas foram determinadas nos grupos controle e azitromicina do que nos grupos o grupo LPS (Tabela 1). Além disso, um nível mais alto de TNF-α foi medido no grupo LPS (Tabela 2).A resposta imune materna é determinada para o sucesso da gravidez. Modelos animais têm sido usados para elucidar essa questão. O mecanismo subjacente à perda precoce da gravidez está associado a várias moléculas inflamatórias; assim, a modulação dos módulos inflamatórios é útil. A inflamação excessiva pode levar a resultados desfavoráveis, como aborto espontâneo e reabsorção fetal. As áreas de implantação são extremamente sensíveis às citocinas LPS e Th1 (TNF-α e lL-2) durante o início da gravidez em camundongos. Essas moléculas têm a capacidade de induzir a reabsorção embrionária. Baixas doses de LPS, sem afetar a sobrevivência da mãe, causam altas taxas de reabsorção embrionária durante o início da gravidez. A desregulação das redes de citocinas resulta em resultados adversos da gravidez. As citocinas Th2, incluindo IL-10, têm um papel protetor, enquanto as citocinas Th1, incluindo TNF-α, são fatores abortivos na gravidez. Níveis aumentados de TNF-α causados por LPS resultaram em perfusão placentária insuficiente, melhora de eventos trombóticos e hipóxia placentária e fetal. No estudo atual, o tratamento com LPS aumentou o nível de TNF-α, o que determinou uma diminuição na taxa de gravidez. Foi relatado que o nível de TNF-α aumentado de LPS está intimamente ligado à perda de gravidez recorrente. Em outro estudo, a concentração da proteína de ligação ao LPS no líquido amniótico foi aumentada em pacientes que tiveram uma perda fetal espontânea.
No estudo atual, a azitromicina aumentou a taxa de gravidez 3,5 vezes em comparação com o LPS grupo (Tabela 1). Além disso, ocorreu uma concentração de IL-10 maior () no grupo azitromicina + LPS do que nos outros grupos, e o nível de TNF-α foi menor () no grupo azitromicina + LPS do que no grupo LPS (Tabela 2). Eritromicina e azitromicina são usadas no tratamento de infecções endocervicais por clamídia e pneumonia por micoplasma em pacientes obstétricas. A azitromicina pode ser mais eficaz contra infecções endometriais porque fornece níveis importantes para os tecidos por um longo período. A passagem transplacentária da azitromicina é limitada e a azitromicina e outros antibióticos macrolídeos são geralmente aceitos como seguros na gravidez. O aumento nas taxas de gravidez no grupo azitromicina + LPS (Tabela 1) pode refletir o efeito depressivo dos macrolídeos na produção de citocinas pró-inflamatórias e o efeito potencializador no nível de IL-10. Os efeitos supressores de macrolídeos, incluindo azitromicina, no nível de TNF-α e os efeitos potencializadores dessas drogas no nível de IL-10 foram relatados. Além disso, as injeções de IL-10 previnem abortos induzidos por LPS e diminuem a morte fetal induzida por LPS.
Em conclusão, a perda de gravidez mediada por infecção ou endotoxemia pode ser evitada usando azitromicina durante o período de gravidez.
Conflito de interesses
O autor declara que não há conflito de interesses.
Agradecimentos
O autor agradece ao Dr. Enver YAZAR e ao Dr. Ibrahim AYDIN pela assistência científica.