Streszczenie
Celem tego badania było określenie wpływ azytromycyny na poronienie wywołane LPS. Trzydzieści sześć ciężarnych samic szczurów Wistar podzielono na 4 równe grupy w następujący sposób: grupa kontrolna, w której w 10. dniu ciąży podano dożylnie 0,3 ml roztworu soli fizjologicznej; grupa azytromycyny, w której azytromycynę podawano doustnie w dawce 350 mg kg-1 dzień w 9, 10 i 11 dniu ciąży; grupa lipopolisacharydów, w której LPS podawano dożylnie przez żyłę ogonową w dawce 160 µg kg-1 w 10 dniu ciąży; oraz grupę azytromycyny + LPS, w której azytromycynę podawano doustnie w dawce 350 mg kg-1 w 9, 10 i 11 dniu ciąży, a LPS podawano dożylnie w dawce 160 μg kg-1 w 10 dniu ciąży. Próbki krwi pobrano z żyły ogonowej 10 dnia doświadczenia. Określono wskaźniki ciąż. Poziomy czynnika martwicy nowotworu alfa (TNF-a) i interleukiny (IL-10) mierzono za pomocą testu ELISA. Azytromycyna zapobiegała () utracie ciąży wywołanej LPS. Wyższe poziomy TNF-α i IL-10 zmierzono () odpowiednio w grupach LPS i azytromycyny + LPS. Podsumowując, azytromycyna może być przydatna w przypadku utraty ciąży zależnej od infekcji lub endotoksemii.
1. Wprowadzenie
Matczyny układ odpornościowy jest w stanie rozpoznać i odmówić odpowiedzi na antygeny płodu. Jednym z najczęstszych niekorzystnych wyników w pierwszym trymestrze ciąży jest poronienie samoistne; odsetek poronień samoistnych u kobiet wynosi 15–20%. Jednak mechanizmy leżące u podstaw utraty ciąży spowodowanej infekcjami matki nie są jasne.
Lipopolisacharyd (LPS), endotoksyna pochodząca z bakterii Gram-ujemnych, był używany do wywołania odpowiedzi zapalnej w badaniach eksperymentalnych z ciążą. Jest dobrze znany jako czynnik wywołujący aborcję i poród przedwczesny poprzez prozapalne cytokiny i tlenek azotu. Dominująca produkcja cytokin pomocniczych T (Th2) jest charakterystyczna dla prawidłowej ciąży, podczas gdy dominująca produkcja cytokin Th1 jest charakterystyczna dla aborcji i nawrotów aborcji. Zmiana profilu cytokin w surowicy matki z tendencyjności Th2 na Th1 powoduje komplikacje u kobiet w ciąży, takie jak samoistne poronienia i stan przedrzucawkowy.
Oprócz bezpośredniego działania przeciwbakteryjnego makrolidy wykazują również działanie przeciwzapalne nieruchomości . Azytromycyna ma podobną skuteczność w porównaniu z erytromycyną lub amoksycyliną; azytromycyna ma również mniej działań niepożądanych w leczeniu kobiet w ciąży z zakażeniami Chlamydia trachomatis. Ze względu na tę cechę wśród położników coraz częściej stosuje się azytromycynę w leczeniu kobiet w ciąży z niepowikłanymi zakażeniami C. trachomatis. Azytromycyna jest klinicznie skuteczna w leczeniu powszechnych infekcji układu oddechowego, skóry / skóry, niegonokokowego zapalenia cewki moczowej i zapalenia szyjki macicy wywołanego przez C. trachomatis. Azytromycyna jest lekiem klasy B stosowanym w ciąży.
Równowaga między czynnikiem martwicy nowotworu-alfa (TNF-α) a interleukiną (IL-10) jest określona dla powodzenia ciąży. Zawsze, gdy wzrasta poziom TNF-α, dochodzi do poronienia, a IL-10 wspomaga ciążę. Ze względu na brak odpowiedniego leczenia zapobiegawczego wczesnej utraty ciąży, postawiono hipotezę, że azytromycyna może zapobiegać utracie ciąży wywołanej LPS ze względu na hamujący wpływ na TNF-α i nasilający wpływ na IL-10.
Celem tego badania było określenie wpływu azytromycyny na utratę ciąży wywołaną LPS u szczurów.
2. Materiały i metody
2.1. Zwierzę
Protokół badania został zatwierdzony przez Komisję Etyczną Uniwersytetu Necmettin Erbakan, Centrum Medycyny Doświadczalnej, Badań i Aplikacji, Konya, Turcja. W tym badaniu wykorzystano 36 samic i 9 samców szczurów Wistar (odpowiednio g i g, w wieku 5-6 miesięcy). Szczury karmiono standardową granulowaną dietą, a wodę z kranu dostarczano ad libitum jako wodę do picia. Zwierzęta hodowano w standardowych klatkach w 12-godzinnym cyklu światło / ciemność w temperaturze pokojowej w środowisku o kontrolowanej wilgotności.
2.2. Procedura eksperymentalna
LPS (Escherichia coli, serotyp O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Niemcy) i azytromycyna (Zitromax, 200 mg / 5 ml, zawiesina doustna, Pfizer, Istambuł, Turcja) zostały rozcieńczone z solą fizjologiczną wolną od pirogenów do odpowiednich stężeń.
Samice szczurów umieszczono w klatkach z samcami przez 1 dzień, a obecność czopu pochwowego uznano za dzień 0 ciąży. Dziesiąty do dwunastego dnia ciąży szczura odpowiada mniej więcej pierwszemu trymestrowi ciąży u człowieka. Ciężarne szczury podzielono losowo na 4 grupy w następujący sposób: grupa kontrolna, w której 0.3 ml normalnego roztworu soli podano dożylnie w 10 dniu ciąży (); grupę azytromycyny, w której azytromycynę podawano doustnie w dawce 350 mg kg-1 dzień w 9, 10 i 11 dniu ciąży (); gdzie grupa LPS LPS podawano dożylnie przez żyłę ogonową w dawce 160 μg kg-1 w 10. dniu ciąży (); azytromycyna + LPS, w której azytromycynę podawano doustnie w dawce 350 mg kg-1 w 9, 10 i 11 dniu ciąży, a LPS dożylnie w dawce 160 μg kg-1 w 10 dniu ciąży (). Próbki krwi pobrano z żyły ogonowej 10 dnia doświadczenia (3 godziny po podaniu LPS) i wszystkie zwierzęta obserwowano w czasie ciąży. Ponadto określono zwierzęta, które rodziły i nie rodziły. Pod koniec badania wszystkie zwierzęta poddano eutanazji w znieczuleniu tiopentalnym sodem (70 mg / kg, dootrzewnowo; szczepionka Pental Sodium 1 g, I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istambuł, Turcja).
2.3. Pomiary
Próbki odwirowano, a próbki surowicy przechowywano w -70 ° C do czasu analizy. Poziomy TNF-α (zestaw eBioscience Rat TNF-α, czułość 11 pg / ml, San Diego, Kalifornia, USA) i IL-10 (zestaw eBioscience Rat IL-10, czułość 1,5 pg / ml, San Diego, Kalifornia, USA) określono przy 450 nm za pomocą dostępnych w handlu zestawów ELISA z czytnikiem ELISA (MWGt Lambda Scan 200, USA).
2.4. Analiza statystyczna
Wskaźniki ciąż w grupach oceniano za pomocą testu chi-kwadrat, a stężenia TNF-α i IL-10 porównano z analizą ANOVA i testem Tukeya. Dane wyrażono jako średnią ± SE. Liczbę potomstwa w każdej grupie oceniano testem ANOVA i Duncana. Znaczenie przyjęto na poziomie.
3. Wyniki
Wszystkie zwierzęta były obserwowane podczas ciąży. Średnia waga szczurów wynosiła g przed ciążą ig pod koniec ciąży. Azytromycyna hamowała () utratę ciąży wywołaną LPS i nie stwierdzono niekorzystnego wpływu na wskaźnik ciąż (Tabela 1). Poziom TNF-α był wyższy () w grupie LPS, a poziomy IL-10 były niższe () w grupie azytromycyny i grupie kontrolnej (tab. 2). Ponadto stężenie IL-10 w grupie azytromycyny + LPS było istotnie wyższe () niż w pozostałych grupach (tab. 2). Odsetek potomstwa był istotny statystycznie () w grupie LPS w porównaniu do wszystkich innych grup (ryc. 1).
|
||||||||||||||||||||||||
| LPS: lipopolisacharyd (160 µg kg− 1 dożylnie Escherichia coli 0111: B4). a, b Różne litery w tej samej kolumnie są istotne statystycznie (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Komentarz
Celem tego badania było określenie wpływu azytromycyny na aborcję septyczną. Wiele czynników endogennych, takich jak prostaglandyny lub cytokiny, odgrywa kluczową rolę podczas ciąży. Nawracająca samoistna aborcja jest klasycznie definiowana jako utrata trzech lub więcej ciąż i występuje zwykle przed 20. tygodniem ciąży. Niedawno nawracające spontaniczne poronienia zostały ponownie zdefiniowane jako samoistna utrata dwóch lub więcej ciąż klinicznych. Niekorzystne skutki ciąży, takie jak poronienie samoistne, poród przedwczesny, stan przedrzucawkowy i zahamowanie wzrostu wewnątrzmacicznego, mogą wynikać z deregulacji sieci cytokin.
W obecnym badaniu sama azytromycyna nie wywierała negatywnego wpływu na wskaźnik ciąż (tabela 1). Donoszono, że profilaktyczne stosowanie azytromycyny może zmniejszyć liczbę poronień związanych z zabiegiem i może być bezpieczne u kobiet w ciąży.
W obecnym badaniu stwierdzono wyższy wskaźnik ciąż w grupie kontrolnej i grupie azytromycyny niż w grupie grupa LPS (tabela 1). Ponadto w grupie LPS zmierzono wyższy poziom TNF-α (tab. 2).Odpowiedź immunologiczna matki jest określona dla powodzenia ciąży. Do wyjaśnienia tego pytania wykorzystano modele zwierzęce. Mechanizm leżący u podstaw wczesnej utraty ciąży jest związany z kilkoma cząsteczkami zapalnymi; w związku z tym przydatna jest modulacja modułów zapalnych. Nadmierny stan zapalny może prowadzić do niekorzystnych wyników, takich jak samoistne poronienie i resorpcja płodu. Obszary implantacji są niezwykle wrażliwe na cytokiny LPS i Th1 (TNF-α i IL-2) we wczesnej ciąży u myszy. Te cząsteczki mają zdolność wywoływania resorpcji embrionalnej. Niskie dawki LPS, bez wpływu na przeżycie matki, powodują wysokie wskaźniki resorpcji zarodka we wczesnej ciąży. Deregulacja sieci cytokin prowadzi do niekorzystnych wyników ciąży. Cytokiny Th2, w tym IL-10, pełnią rolę ochronną, podczas gdy cytokiny Th1, w tym TNF-α, są czynnikami poronnymi w ciąży. Podwyższone poziomy TNF-α spowodowane przez LPS skutkowały niewystarczającą perfuzją łożyska, złagodzeniem zdarzeń zakrzepowych oraz niedotlenieniem łożyska i płodu. W obecnym badaniu leczenie LPS spowodowało wzrost poziomu TNF-α, co determinowało spadek wskaźnika ciąż. Donoszono, że poziom TNF-α podwyższony przez LPS jest ściśle powiązany z nawracającymi poronieniami. W innym badaniu stężenie białka wiążącego LPS w płynie owodniowym było zwiększone u pacjentek, u których doszło do samoistnej utraty płodu.
W obecnym badaniu azytromycyna zwiększyła wskaźnik ciąż 3,5-krotnie w porównaniu z LPS. grupy (tabela 1). Ponadto w grupie azytromycyny + LPS wystąpiło wyższe stężenie IL-10 () niż w pozostałych grupach, a poziom TNF-α był niższy () w grupie azytromycyny + LPS niż w grupie LPS (tab. 2). Erytromycyna i azytromycyna są stosowane w leczeniu zakażeń chlamydiami szyjki macicy i mykoplazmowego zapalenia płuc u położnic. Azytromycyna może być skuteczniejsza przeciwko infekcjom endometrium, ponieważ zapewnia ważne poziomy w tkankach przez długi czas. Przenikanie azytromycyny przez łożysko jest ograniczone, a azytromycyna i inne antybiotyki makrolidowe są ogólnie akceptowane jako bezpieczne w ciąży. Zwiększone wskaźniki ciąż w grupie azytromycyny + LPS (tab. 1) mogą odzwierciedlać depresyjny wpływ makrolidów na wytwarzanie cytokin prozapalnych i nasilający wpływ na poziom IL-10. Opisano supresyjny wpływ makrolidów, w tym azytromycyny, na poziom TNF-α i wzmacniający wpływ tych leków na poziom IL-10. Ponadto zastrzyki IL-10 zapobiegają poronieniom wywołanym przez LPS i zmniejszają śmierć płodów wywołaną przez LPS.
Podsumowując, utracie ciąży spowodowanej infekcją lub endotoksemią można zapobiec stosując azytromycynę w okresie ciąży.
Konflikt interesów
Autor oświadcza, że nie ma konfliktu interesów.
Podziękowania
Autor dziękuje dr. Enverowi YAZARowi i dr. Ibrahimowi AYDINowi za pomoc naukową.