Samenvatting
Het doel van deze studie was om te bepalen het effect van azithromycine op door LPS geïnduceerd zwangerschapsverlies. Zesendertig drachtige vrouwelijke Wistar-ratten werden als volgt in 4 gelijke groepen verdeeld: controlegroep, waar 0,3 ml normale zoutoplossing intraveneus werd toegediend op dag 10 van de dracht; azithromycinegroep, waarbij azithromycine oraal werd toegediend in een hoeveelheid van 350 mg kg − 1 dag op dag 9, 10 en 11 van de zwangerschap; lipopolysaccharidegroep, waarbij LPS intraveneus werd toegediend via de staartader bij 160 μg kg − 1 op dag 10 van de zwangerschap; en de azithromycine + LPS-groep, waar azithromycine oraal werd toegediend met 350 mg kg − 1 dag op dag 9, 10 en 11 van de zwangerschap en LPS intraveneus werd toegediend in een hoeveelheid van 160 μg kg − 1 op dag 10 van de zwangerschap. Bloedmonsters werden op dag 10 van het experiment uit de staartader genomen. Zwangerschapscijfers werden bepaald. Tumornecrosefactor-alfa (TNF-α) en interleukine (IL-10) niveaus werden gemeten met ELISA. Azithromycin voorkwam () LPS-geïnduceerd zwangerschapsverlies. Hogere TNF-α- en IL-10-niveaus werden gemeten () in respectievelijk de LPS- en azithromycine + LPS-groepen. Concluderend kan azithromycine nuttig zijn bij infectie- of endotoxemie-afhankelijke zwangerschapsverliezen.
1. Inleiding
Het immuunsysteem van de moeder is in staat een reactie tegen foetale antigenen te herkennen en te weigeren. Een van de meest voorkomende ongunstige uitkomsten tijdens het eerste trimester van de zwangerschap is een spontane abortus; het percentage spontane abortus bij vrouwen is 15-20%. De mechanismen die ten grondslag liggen aan zwangerschapsverlies als gevolg van maternale infecties zijn echter niet duidelijk.
Lipopolysaccharide (LPS), een endotoxine afgeleid van gramnegatieve bacteriën, is gebruikt om een ontstekingsreactie op te wekken in experimentele studies met zwangerschap. Het is bekend als een trigger voor abortus en vroeggeboorte via pro-inflammatoire cytokines en stikstofmonoxide. De overheersende productie van T-helper (Th2) -cytokinen is een kenmerk van normale zwangerschap, terwijl een overheersende productie van Th1-cytokinen een kenmerk is van abortus en herhaalde abortus. Een verandering van een Th2-bevooroordeeld naar een Th1-bevooroordeeld cytokineprofiel in maternaal serum resulteert in complicaties voor zwangere vrouwen, zoals spontane abortussen en pre-eclampsie.
Naast het directe antimicrobiële effect, vertonen macroliden ook ontstekingsremmend eigendommen . Azitromycine heeft een vergelijkbare werkzaamheid als erytromycine of amoxicilline; azithromycine heeft ook minder bijwerkingen bij de behandeling van zwangere vrouwen met Chlamydia trachomatis-infecties. Vanwege dit kenmerk neemt het gebruik van azithromycine om zwangere vrouwen met ongecompliceerde C. trachomatis-infecties te behandelen onder verloskundigen toe. Azithromycine is klinisch effectief bij de behandeling van veel voorkomende luchtweginfecties, huid- / huidstructuurinfecties, niet -okokken urethritis en cervicitis veroorzaakt door C. trachomatis. Azithromycine is gecategoriseerd als een klasse B-medicijn tijdens de zwangerschap.
De balans tussen tumornecrosefactor-alfa (TNF-α) en interleukine (IL-10) wordt bepaald voor het succes van de zwangerschap. Telkens wanneer het niveau van TNF-α stijgt, vindt abortus plaats, terwijl IL-10 de zwangerschap ondersteunt. Vanwege het ontbreken van een adequate preventieve behandeling van vroeg zwangerschapsverlies, wordt verondersteld dat azithromycine LPS-geïnduceerd zwangerschapsverlies kan voorkomen vanwege een remmend effect op TNF-α en een potentiërend effect op IL-10.
Het doel van deze studie was om het effect van azithromycine op door LPS geïnduceerd zwangerschapsverlies bij ratten te bepalen.
2. Materialen en methoden
2.1. Dier
Het studieprotocol werd goedgekeurd door de ethische commissie van de Necmettin Erbakan University, Experimental Medicine, Research and Application Center, Konya, Turkije. Zesendertig vrouwelijke en 9 mannelijke Wistar-ratten (respectievelijk g en g, 5-6 maanden oud) werden in deze studie gebruikt. Ratten kregen een standaard gepelleteerd dieet en kraanwater werd ad libitum als drinkwater verstrekt. Dieren werden gefokt in standaard kooien met een licht / donker-cyclus van 12 uur bij kamertemperatuur in een vochtige omgeving.
2.2. Experimentele procedure
LPS (Escherichia coli, serotype O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Duitsland) en azitromycine (Zitromax, 200 mg / 5 ml, orale suspensie, Pfizer, Istanbul, Turkije) werden verdund met pyrogeenvrije zoutoplossing tot geschikte concentraties.
Vrouwelijke ratten werden 1 dag samen met mannetjes gekooid en de aanwezigheid van een vaginale plug werd aangemerkt als dag 0 van de dracht. De tiende tot 12e dag in de zwangerschap van een rat komt ongeveer overeen met het eerste trimester van de menselijke zwangerschap. Zwangere ratten werden als volgt willekeurig in 4 groepen verdeeld: controlegroep, waarbij 0.3 ml normale zoutoplossing werd intraveneus toegediend op dag 10 van de zwangerschap (); azithromycinegroep, waarbij azithromycine oraal werd toegediend in een hoeveelheid van 350 mg kg − 1 dag op dag 9, 10 en 11 van de zwangerschap (); waar de LPS-groep, LPS intraveneus werd toegediend via de staartader bij 160 μg kg − 1 op dag 10 van de zwangerschap (); en de azithromycine + LPS-groep, waar azithromycine oraal werd toegediend met 350 mg kg − 1 dag op dag 9, 10 en 11 van de zwangerschap en LPS intraveneus werd toegediend in een hoeveelheid van 160 μg kg − 1 op dag 10 van de zwangerschap (). Bloedmonsters werden verkregen uit de staartader op dag 10 van het experiment (3 uur na toediening van LPS) en alle dieren werden gevolgd tijdens de dracht. Bovendien werden dieren vastgesteld die wel en niet bevielen. Aan het einde van de studie werden alle dieren geëuthanaseerd onder thiopental natriumanesthesie (70 mg / kg, intraperitoneaal; Pental Sodium 1 g inj., I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istanbul, Turkije).
2.3. Metingen
Monsters werden gecentrifugeerd en serummonsters werden tot analyse bij -70 ° C bewaard. TNF-α (eBioscience Rat TNF-α-kit, gevoeligheid 11 pg / ml, San Diego, CA, VS) en IL-10 (eBioscience Rat IL-10kit, gevoeligheid 1,5 pg / ml, San Diego, CA, VS) waren bepaald bij 450 nm door commerciële ELISA-kits met ELISA-lezer (MWGt Lambda Scan 200, VS).
2.4. Statistische analyse
De zwangerschapspercentages van de groepen werden geëvalueerd met behulp van een chikwadraattest en de concentraties van TNF-α en IL-10 werden vergeleken met ANOVA en de Tukey-test. Gegevens worden uitgedrukt als de gemiddelde ± SE. Het aantal nakomelingen in elke groep werd geëvalueerd door middel van ANOVA en Duncan-test. Betekenis werd op het niveau geaccepteerd.
3. Resultaten
Alle dieren werden gevolgd tijdens de dracht. Het gemiddelde gewicht van de ratten was g vóór de dracht en g aan het einde van de dracht. Azithromycine remde () LPS-geïnduceerd zwangerschapsverlies en er waren geen nadelige effecten op het zwangerschapspercentage (tabel 1). Het TNF-α-niveau was hoger () in de LPS-groep en de IL-10-niveaus waren lager () in de azithromycine- en controlegroepen (Tabel 2). Bovendien was de concentratie van IL-10 in de azithromycine + LPS-groep significant hoger () dan de andere groepen (tabel 2). Het aantal nakomelingen was statistisch significant () in de LPS-groep in vergelijking met alle andere groepen (Figuur 1).
|
||||||||||||||||||||||||
| LPS: lipopolysaccharide (160 µg kg− 1 intraveneus, Escherichia coli 0111: B4). a, b Verschillende letters in dezelfde kolom zijn statistisch significant (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Opmerking
Het doel van deze studie was om het effect van azithromycine op septische abortus te bepalen. Veel endogene middelen, zoals prostaglandinen of cytokinen, spelen een cruciale rol tijdens de zwangerschap. Terugkerende spontane abortus wordt klassiek gedefinieerd als drie of meer zwangerschapsverliezen en treedt meestal op vóór 20 weken zwangerschap. Onlangs is terugkerende spontane abortus opnieuw gedefinieerd als het spontane verlies van twee of meer klinische zwangerschappen. Ongunstige zwangerschapsresultaten, zoals spontane abortus, vroeggeboorte, pre-eclampsie en intra-uteriene groeirestrictie, kunnen het gevolg zijn van een deregulering van cytokinenetwerken.
In de huidige studie had azithromycine alleen geen negatief effect op de zwangerschapspercentage (tabel 1). Er is gemeld dat het profylactische gebruik van azitromycine het zwangerschapsverlies door de procedure kan verminderen en mogelijk veilig kan zijn bij zwangere vrouwen.
In de huidige studie werden hogere zwangerschapspercentages vastgesteld in de controlegroep en de azithromycinegroep dan in de de LPS-groep (tabel 1). Bovendien werd een hoger TNF-α-niveau gemeten in de LPS-groep (tabel 2).De immuunrespons van de moeder wordt bepaald voor het succes van de zwangerschap. Diermodellen zijn gebruikt om deze vraag te verhelderen. Het mechanisme dat ten grondslag ligt aan het vroege zwangerschapsverlies is geassocieerd met verschillende ontstekingsmoleculen; modulatie van de ontstekingsmodules is dus nuttig. Overmatige ontsteking kan leiden tot ongunstige resultaten, zoals spontane abortus en foetale resorptie. Inplantingsgebieden zijn extreem gevoelig voor LPS- en Th1-cytokinen (TNF-α en lL-2) tijdens de vroege zwangerschap bij muizen. Deze moleculen hebben het vermogen om embryonale resorptie te induceren. Lage doses LPS, zonder de overleving van de moeder te beïnvloeden, veroorzaken hoge percentages embryonale resorptie tijdens de vroege zwangerschap. Deregulering van cytokinenetwerken leidt tot ongunstige zwangerschapsresultaten. Th2-cytokinen, waaronder IL-10, hebben een beschermende rol, terwijl Th1-cytokinen, waaronder TNF-α, abortieve factoren zijn tijdens de zwangerschap. Verhoogde TNF-α-spiegels veroorzaakt door LPS resulteerden in onvoldoende placentaire perfusie, verbetering van trombotische gebeurtenissen en placenta en foetale hypoxie. In de huidige studie verhoogde de LPS-behandeling het TNF-α-niveau, wat een afname van het zwangerschapspercentage vaststelde. Er is gerapporteerd dat het LPS-verhoogde TNF-α-niveau nauw verband houdt met herhaald zwangerschapsverlies. In een andere studie was de concentratie van LPS-bindend eiwit in het vruchtwater verhoogd bij patiënten met een spontaan foetaal verlies.
In de huidige studie verhoogde azithromycine het zwangerschapspercentage 3,5 keer in vergelijking met de LPS. groep (tabel 1). Bovendien trad een hogere IL-10-concentratie op () in de azithromycine + LPS-groep dan die van de andere groepen, en het TNF-α-niveau was lager () in de azithromycine + LPS-groep dan in de LPS-groep (tabel 2). Erytromycine en azithromycine worden gebruikt bij de behandeling van endocervicale chlamydia-infecties en mycoplasma-pneumonie bij obstetrische patiënten. Azithromycine is mogelijk effectiever tegen endometriuminfecties omdat het gedurende een lange periode belangrijke weefselspiegels levert. Transplacentale doorgang van azithromycine is beperkt, en algemeen wordt aangenomen dat azithromycine en andere macrolide-antibiotica veilig zijn tijdens de zwangerschap. Verhoogde zwangerschapspercentages in de azithromycine + LPS-groep (tabel 1) kunnen het depressieve effect van macroliden op de productie van pro-inflammatoire cytokines en het versterkende effect op het IL-10-niveau weerspiegelen. De onderdrukkende effecten van macroliden, waaronder azithromycine, op het TNF-α-niveau en de versterkende effecten van deze geneesmiddelen op het IL-10-niveau zijn gerapporteerd. Bovendien voorkomen IL-10-injecties LPS-geïnduceerde abortussen en verminderen LPS-geïnduceerde foetale sterfte.
Concluderend, infectie- of endotoxemie-gemedieerd zwangerschapsverlies kan worden voorkomen door azithromycine te gebruiken tijdens de zwangerschapsperiode.
Belangenconflicten
De auteur verklaart dat er is geen belangenconflict.
Dankbetuigingen
De auteur bedankt Dr. Enver YAZAR en Dr. Ibrahim AYDIN voor de wetenschappelijke hulp.