Azitromycin forhindrer graviditetstap: Reduksjon av nivået av tumornekrosefaktor-alfa og økning av interleukin-10 hos rotter

Abstrakt

Målet med denne studien var å bestemme effekten av azitromycin på LPS-indusert graviditetstap. Tretti-seks gravide Wistar-hunnrotter ble delt inn i 4 like store grupper som følger: kontrollgruppe, hvor 0,3 ml normal saltoppløsning ble administrert intravenøst på dag 10 av svangerskapet; azitromycin-gruppe, hvor azitromycin ble administrert oralt ved 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 og 11 av svangerskapet; lipopolysakkaridgruppe, der LPS ble administrert intravenøst via halevenen ved 160 μg kg − 1 på graviditetens dag 10; og azitromycin + LPS-gruppen, hvor azitromycin ble administrert oralt ved 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 og 11 av svangerskapet og LPS ble administrert intravenøst ved 160 µg kg − 1 på dag 10 i svangerskapet. Blodprøver ble oppnådd fra halevenen på dag 10 i eksperimentet. Graviditetsgraden ble bestemt. Tumornekrosefaktor-alfa (TNF-α) og interleukin (IL-10) nivåer ble målt ved ELISA. Azitromycin forhindret () LPS-indusert graviditetstap. Høyere TNF-a- og IL-10-nivåer ble målt () i henholdsvis LPS- og azitromycin + LPS-gruppene. Avslutningsvis kan azitromycin være nyttig ved infeksjons- eller endotoksemi-avhengig graviditetstap.

1. Innledning

Maternets immunsystem er i stand til å gjenkjenne og nekte respons mot fosterantigener. En av de vanligste ugunstige resultatene i løpet av første trimester av svangerskapet er spontan abort; frekvensen av spontanabort er 15% –20% hos kvinner. Imidlertid er mekanismene som ligger til grunn for graviditetstap forårsaket av moderinfeksjoner ikke klare.

Lipopolysakkarid (LPS), et endotoksin avledet fra gramnegative bakterier, har blitt brukt til å utgjøre inflammatorisk respons i eksperimentelle studier med graviditet. Det er kjent som en utløser for abort og for tidlig fødsel via proinflammatoriske cytokiner og nitrogenoksid. Den overveiende produksjonen av T-hjelper (Th2) cytokiner er karakteristisk for normal graviditet, mens en overveiende produksjon av Th1 cytokiner er karakteristisk for abort og tilbakevendende abort. En endring fra en Th2-forspent til en Th1-forspent cytokinprofil i mors serum resulterer i komplikasjoner for gravide, som spontane aborter og svangerskapsforgiftning. eiendommer . Azitromycin har lignende effekt sammenlignet med erytromycin eller amoksicillin; azitromycin har også færre bivirkninger ved behandling av gravide kvinner med Chlamydia trachomatis-infeksjoner. På grunn av denne funksjonen øker bruk av azitromycin til å behandle gravide med ukompliserte C. trachomatis-infeksjoner blant fødselsleger. Azitromycin er klinisk effektiv i behandlingen av vanlige luftveisinfeksjoner, hud / hudstrukturinfeksjoner, urinrørsbetennelse i urinveis og cervisitt på grunn av C. trachomatis. Azitromycin er kategorisert som et legemiddel i klasse B under graviditet.

Balansen mellom tumornekrose faktor-alfa (TNF-α) og interleukin (IL-10) bestemmes for graviditetssuksess. Når nivået av TNF-α øker, oppstår abort, mens IL-10 støtter graviditeten. På grunn av manglende eksistens av tilstrekkelig forebyggende behandling av tidlig graviditetstap, er det antatt at azitromycin kan forhindre LPS-indusert graviditetstap på grunn av en hemmende effekt på TNF-α og potensierende effekt på IL-10.

Målet med denne studien var å bestemme effekten av azitromycin på LPS-indusert graviditetstap hos rotter.

2. Materialer og metoder

2.1. Dyr

Studieprotokollen ble godkjent av den etiske komiteen ved Necmettin Erbakan University, eksperimentell medisin, forsknings- og applikasjonssenter, Konya, Tyrkia. Tretti-seks hunn- og 9 Wistar-hannrotter (henholdsvis g og g, 5-6 måneder gamle) ble brukt i denne studien. Rotter ble matet med en standard pelletert diett, og vann fra springen ble gitt ad libitum som drikkevann. Dyr ble avlet i standard merder på en 12 timers lys / mørk syklus ved romtemperatur i et fuktighetskontrollert miljø.

2.2. Eksperimentell prosedyre

LPS (Escherichia coli, serotype O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Tyskland) og azitromycin (Zitromax, 200 mg / 5 ml, oral suspensjon, Pfizer, Istanbul, Tyrkia) ble fortynnet med pyrogenfri saltvann til passende konsentrasjoner.

Hunrotter ble buret med hanner i 1 dag, og tilstedeværelsen av en vaginal plugg ble betegnet som dag 0 av svangerskapet. Tiende til 12. dag i svangerskap hos en rotte tilsvarer omtrent første trimester av graviditet hos mennesker. Gravide rotter ble tilfeldig delt inn i 4 grupper som følger: kontrollgruppe, hvor 0.3 ml normal saltløsning ble administrert intravenøst på dag 10 av svangerskapet (); azitromycin-gruppe, hvor azitromycin ble administrert oralt ved 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 og 11 av svangerskapet (); der LPS-gruppen ble LPS administrert intravenøst via halevenen ved 160 μg kg − 1 på graviditetens dag 10 (); og azitromycin + LPS-gruppen, hvor azitromycin ble administrert oralt ved 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 og 11 av svangerskapet og LPS ble administrert intravenøst ved 160 µg kg − 1 på dag 10 i svangerskapet (). Blodprøver ble oppnådd fra halevenen på dag 10 i eksperimentet (3 timer etter LPS-administrering) og alle dyr ble fulgt under graviditet. I tillegg ble dyr bestemt som fødte og ikke fødte. På slutten av studien ble alle dyrene avlivet under tiopental natriumbedøvelse (70 mg / kg, intraperitonealt; Pental Sodium 1 g inj., I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istanbul, Tyrkia).

2.3. Målinger

Prøver ble sentrifugert og serumprøver ble lagret ved -70 ° C til analyse. TNF-α (eBioscience Rat TNF-α-sett, følsomhet 11 pg / ml, San Diego, CA, USA) og IL-10 (eBioscience Rat IL-10kit, sensitivitet 1,5 pg / ml, San Diego, CA, USA) var bestemt ved 450 nm ved kommersielle ELISA-sett med ELISA-leser (MWGt Lambda Scan 200, USA).

2.4. Statistisk analyse

Graviditetsgraden for gruppene ble evaluert ved hjelp av en chi-kvadrat-test, og konsentrasjonene av TNF-α og IL-10 ble sammenlignet med ANOVA og Tukey-testen. Data er uttrykt som gjennomsnitt ± SE. Antall avkom i hver gruppe ble evaluert ved ANOVA og Duncan-test. Betydning ble akseptert på nivået.

3. Resultater

Alle dyr ble fulgt under graviditet. Gjennomsnittsvekten til rottene var g før graviditet og g på slutten av svangerskapet. Azitromycin hemmet () LPS-indusert graviditetstap, og det var ingen bivirkninger på graviditetsraten (tabell 1). TNF-α-nivået var høyere () i LPS-gruppen, og IL-10-nivåene var lavere () i azitromycin- og kontrollgruppene (tabell 2). I tillegg var konsentrasjonen av IL-10 i azitromycin + LPS-gruppen signifikant høyere () enn de andre gruppene (tabell 2). Avkomfrekvensen var statistisk signifikant () i LPS-gruppen sammenlignet med alle andre grupper (figur 1).

Figur 1

Antall avkom i grupper. For å indusere graviditetstapet med LPS ble 160 μg kg − 1 LPS (Escherichia coli 0111: B4) administrert intravenøst via halevenen på dag 10 av svangerskapet i LPS-gruppen. Azitromycin ble administrert oralt ved 350 mg kg − 1 dag på dag 9, 10 og 11 av svangerskapet i azitromycin og azitromycin + LPS-grupper. Blodprøver ble oppnådd fra halevenen på dag 10 i eksperimentet, og alle dyr ble fulgt under graviditet. Dyr som fødte og ikke fødte ble bestemt. Ulike bokstaver er statistisk signifikante ().

4. Kommentar

Målet med denne studien var å bestemme effekten av azitromycin på septisk abort. Mange endogene stoffer, som prostaglandiner eller cytokiner, spiller en sentral rolle under graviditet. Gjentatt spontanabort er klassisk definert som tre eller flere graviditetstap og forekommer vanligvis før 20 ukers svangerskap. Nylig har tilbakevendende spontanabort blitt omdefinert som spontant tap av to eller flere kliniske graviditeter. Uønskede graviditetsutfall, som spontan abort, for tidlig fødsel, svangerskapsforgiftning og intrauterin vekstbegrensning, kan skyldes en deregulering av cytokinnettverk.

I den nåværende studien hadde azitromycin alene ikke en negativ effekt på graviditet (Tabell 1). Det er rapportert at profylaktisk bruk av azitromycin kan redusere prosedyrelatert graviditetstap og kan være trygt hos gravide kvinner.

I den nåværende studien ble høyere graviditetsrater bestemt i kontroll- og azitromycin-gruppene enn i LPS-gruppen (tabell 1). I tillegg ble et høyere TNF-α-nivå målt i LPS-gruppen (tabell 2).Moderens immunrespons bestemmes for graviditetssuksess. Dyremodeller har blitt brukt for å belyse dette spørsmålet. Mekanismen som ligger til grunn for tidlig graviditetstap er assosiert med flere inflammatoriske molekyler; således er modulering av inflammatoriske moduler nyttig. Overdreven betennelse kan føre til ugunstige utfall, som spontan abort og fosterresorpsjon. Implantasjonsområder er ekstremt følsomme for LPS og Th1 cytokiner (TNF-α og lL-2) under tidlig graviditet hos mus. Disse molekylene har evnen til å indusere embryonal resorpsjon. Lave doser av LPS, uten å påvirke mors overlevelse, forårsaker høye nivåer av embryonal resorpsjon under tidlig graviditet. Deregulering av cytokinnettverk resulterer i ugunstige graviditetsutfall. Th2-cytokiner, inkludert IL-10, har en beskyttende rolle, mens Th1-cytokiner, inkludert TNF-α, er abortfaktorer under graviditet. Økte TNF-α-nivåer forårsaket av LPS resulterte i utilstrekkelig perfusjon av placenta, forbedring av trombotiske hendelser og placenta og fosterhypoksi. I den nåværende studien økte LPS-behandlingen TNF-α-nivået, som bestemte en reduksjon i graviditetsraten. Det er rapportert at det LPS-økte TNF-α-nivået er nært knyttet til tilbakevendende graviditetstap. I en annen studie økte konsentrasjonen av LPS-bindende protein i fostervann hos pasienter som hadde et spontant fostertap.

I den nåværende studien økte azitromycin graviditetsraten 3,5 ganger sammenlignet med LPS gruppe (tabell 1). I tillegg oppstod en høyere IL-10-konsentrasjon () i azitromycin + LPS-gruppen enn de for de andre gruppene, og TNF-α-nivået var lavere () i azitromycin + LPS-gruppen enn LPS-gruppen (Tabell 2). Erytromycin og azitromycin brukes til behandling av endocervikale klamydiale infeksjoner og mycoplasma lungebetennelse hos fødselspatienter. Azitromycin kan være mer effektivt mot endometrieinfeksjoner fordi det gir viktige vevsnivåer i lang tid. Transplacental passering av azitromycin er begrenset, og azitromycin og andre makrolidantibiotika er generelt akseptert å være trygge under graviditet. Økt graviditetsrate i azitromycin + LPS-gruppen (tabell 1) kan gjenspeile den depressive effekten av makrolider på proinflammatorisk produksjon av cytokiner og den potensierende effekten på IL-10-nivået. De undertrykkende effektene av makrolider, inkludert azitromycin, på TNF-α-nivået og de potensierende effektene av disse medikamentene på IL-10-nivået er rapportert. Videre forhindrer IL-10-injeksjoner LPS-indusert abort og reduserer LPS-indusert fosterdød.

Avslutningsvis kan infeksjons- eller endotoksemi-mediert graviditetstap forhindres ved bruk av azitromycin i graviditetsperioden.

Interessekonflikt

Forfatteren erklærer at det er ingen interessekonflikt.

Anerkjennelser

Forfatteren takker Dr. Enver YAZAR og Dr. Ibrahim AYDIN for vitenskapelig hjelp.