Abstract
Lo scopo di questo studio era determinare leffetto dellazitromicina sulla perdita di gravidanza indotta da LPS. Trentasei femmine di ratto Wistar gravide sono state divise in 4 gruppi uguali come segue: gruppo di controllo, dove 0,3 mL di soluzione salina normale sono stati somministrati per via endovenosa il giorno 10 della gravidanza; gruppo azitromicina, dove lazitromicina è stata somministrata per via orale a 350 mg kg − 1 giorno nei giorni 9, 10 e 11 di gravidanza; gruppo lipopolisaccaride, in cui LPS è stato somministrato per via endovenosa attraverso la vena della coda a 160 μg kg − 1 il giorno 10 di gravidanza; e il gruppo azitromicina + LPS, dove lazitromicina è stata somministrata per via orale a 350 mg kg − 1 giorno nei giorni 9, 10 e 11 di gravidanza e LPS è stata somministrata per via endovenosa a 160 μg kg − 1 il giorno 10 di gravidanza. I campioni di sangue sono stati ottenuti dalla vena della coda il giorno 10 dellesperimento. Sono stati determinati i tassi di gravidanza. I livelli di fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α) e interleuchina (IL-10) sono stati misurati mediante ELISA. Lazitromicina ha prevenuto () la perdita di gravidanza indotta da LPS. Sono stati misurati livelli più elevati di TNF-α e IL-10 () rispettivamente nei gruppi LPS e azitromicina + LPS. In conclusione, lazitromicina può essere utile nellabbandono della gravidanza dipendente da infezione o endotossiemia.
1. Introduzione
Il sistema immunitario materno è in grado di riconoscere e rifiutare una risposta contro gli antigeni fetali. Uno degli esiti sfavorevoli più comuni durante il primo trimestre di gravidanza è laborto spontaneo; il tasso di aborto spontaneo è del 15-20% nelle donne. Tuttavia, i meccanismi alla base della perdita di gravidanza causata da infezioni materne non sono chiari.
Il lipopolisaccaride (LPS), unendotossina derivata da batteri gram negativi, è stata utilizzata per costituire la risposta infiammatoria in studi sperimentali sulla gravidanza. È noto come fattore scatenante dellaborto e del parto pretermine tramite citochine proinfiammatorie e ossido nitrico. La produzione predominante di citochine T-helper (Th2) è una caratteristica della gravidanza normale, mentre una produzione predominante di citochine Th1 è una caratteristica dellaborto e dellaborto ricorrente. Un passaggio da un profilo di citochine polarizzato Th2 a uno sbilanciato Th1 nel siero materno provoca complicazioni per le donne in gravidanza, come aborti spontanei e preeclampsia.
Oltre alleffetto antimicrobico diretto, i macrolidi mostrano anche antinfiammatori proprietà . Lazitromicina ha unefficacia simile a quella delleritromicina o dellamoxicillina; lazitromicina ha anche meno effetti avversi nel trattamento delle donne in gravidanza con infezioni da Chlamydia trachomatis. A causa di questa caratteristica, luso dellazitromicina per il trattamento di donne in gravidanza con infezioni da C. trachomatis non complicate è in aumento tra gli ostetrici. Lazitromicina è clinicamente efficace nel trattamento delle comuni infezioni respiratorie, della pelle / struttura della pelle, delluretrite non gonococcica e della cervicite dovuta a C. trachomatis. Lazitromicina è classificata come un farmaco di classe B durante la gravidanza.
Lequilibrio tra il fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α) e linterleuchina (IL-10) è determinato per il successo della gravidanza. Ogni volta che il livello di TNF-α aumenta, si verifica laborto, mentre IL-10 supporta la gravidanza. A causa dellinesistenza di un adeguato trattamento preventivo dellabbandono precoce della gravidanza, è stato ipotizzato che lazitromicina possa prevenire la perdita della gravidanza indotta da LPS a causa di un effetto inibitorio sul TNF-α e del potenziamento delleffetto sullIL-10.
Lo scopo di questo studio era determinare leffetto dellazitromicina sulla perdita di gravidanza indotta da LPS nei ratti.
2. Materiali e metodi
2.1. Animale
Il protocollo dello studio è stato approvato dal Comitato Etico della Necmettin Erbakan University, Centro di Medicina Sperimentale, Ricerca e Applicazione, Konya, Turchia. In questo studio sono stati utilizzati trentasei ratti Wistar femmine e 9 maschi (rispettivamente g e g, di età compresa tra 5 e 6 mesi). I ratti sono stati alimentati con una dieta pellettata standard e lacqua del rubinetto è stata fornita ad libitum come acqua potabile. Gli animali sono stati allevati in gabbie standard con un ciclo luce / buio di 12 ore a temperatura ambiente in un ambiente a umidità controllata.
2.2. Procedura sperimentale
LPS (Escherichia coli, sierotipo O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Germania) e azitromicina (Zitromax, 200 mg / 5 mL, sospensione orale, Pfizer, Istanbul, Turchia) sono stati diluiti con soluzione salina apirogena a concentrazioni appropriate.
Le femmine di ratto sono state messe in gabbia con i maschi per 1 giorno e la presenza di un tappo vaginale è stata designata come giorno 0 di gravidanza. Dal decimo al dodicesimo giorno di gravidanza di un ratto corrisponde allincirca al primo trimestre di gravidanza umana. I ratti gravidi sono stati divisi casualmente in 4 gruppi come segue: gruppo di controllo, dove 0.3 mL di soluzione salina normale sono stati somministrati per via endovenosa il giorno 10 di gravidanza (); gruppo azitromicina, dove lazitromicina è stata somministrata per via orale a 350 mg kg-1 giorno nei giorni 9, 10 e 11 di gravidanza (); dove il gruppo LPS, LPS è stato somministrato per via endovenosa attraverso la vena della coda a 160 μg kg − 1 il giorno 10 di gravidanza (); e il gruppo azitromicina + LPS, dove lazitromicina è stata somministrata per via orale a 350 mg kg − 1 giorno nei giorni 9, 10 e 11 di gravidanza e LPS è stata somministrata per via endovenosa a 160 μg kg − 1 il giorno 10 di gravidanza (). I campioni di sangue sono stati ottenuti dalla vena della coda il giorno 10 dellesperimento (3 ore dopo la somministrazione di LPS) e tutti gli animali sono stati seguiti durante la gravidanza. Inoltre, sono stati determinati gli animali che hanno partorito e non hanno partorito. Alla fine dello studio, tutti gli animali sono stati sottoposti a eutanasia in anestesia tiopentale sodica (70 mg / kg, per via intraperitoneale; Pental Sodium 1 g inj., I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istanbul, Turchia).
2.3. Misurazioni
I campioni sono stati centrifugati e i campioni di siero sono stati conservati a -70 ° C fino allanalisi. I livelli di TNF-α (kit eBioscience Rat TNF-α, sensibilità 11 pg / mL, San Diego, CA, USA) e IL-10 (kit eBioscience Rat IL-10, sensibilità 1,5 pg / mL, San Diego, CA, USA) erano determinato a 450 nm da kit ELISA commerciali con lettore ELISA (MWGt Lambda Scan 200, USA).
2.4. Analisi statistica
I tassi di gravidanza dei gruppi sono stati valutati utilizzando un test chi-quadrato e le concentrazioni di TNF-α e IL-10 sono state confrontate con ANOVA e il test di Tukey. I dati sono espressi come media ± SE. Il numero di discendenti in ciascun gruppo è stato valutato mediante ANOVA e test di Duncan. La significatività è stata accettata a livello.
3. Risultati
Tutti gli animali sono stati seguiti durante la gravidanza. Il peso medio dei ratti era g prima della gravidanza eg alla fine della gravidanza. Lazitromicina ha inibito () la perdita di gravidanza indotta da LPS e non ci sono stati effetti avversi sul tasso di gravidanza (Tabella 1). Il livello di TNF-α era più alto () nel gruppo LPS e i livelli di IL-10 erano più bassi () nellazitromicina e nei gruppi di controllo (Tabella 2). Inoltre, la concentrazione di IL-10 nel gruppo azitromicina + LPS era significativamente più alta () rispetto agli altri gruppi (Tabella 2). Il tasso di prole era statisticamente significativo () nel gruppo LPS rispetto a tutti gli altri gruppi (Figura 1).
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| LPS: lipopolisaccaride (160 µg kg− 1 per via endovenosa, Escherichia coli 0111: B4). a, bLettere diverse nella stessa colonna sono statisticamente significative (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Commento
Lo scopo di questo studio era di determinare leffetto dellazitromicina sullaborto settico. Molti agenti endogeni, come le prostaglandine o le citochine, svolgono un ruolo fondamentale durante la gravidanza. Laborto spontaneo ricorrente è definito classicamente come tre o più interruzioni di gravidanza e di solito si verifica prima delle 20 settimane di gestazione. Recentemente, laborto spontaneo ricorrente è stato ridefinito come la perdita spontanea di due o più gravidanze cliniche. Esiti avversi della gravidanza, come laborto spontaneo, il travaglio pretermine, la preeclampsia e la restrizione della crescita intrauterina, possono derivare da una deregolamentazione delle reti di citochine.
Nello studio attuale, lazitromicina da sola non ha presentato un effetto negativo sul tasso di gravidanza (Tabella 1). È stato segnalato che luso profilattico dellazitromicina può ridurre la perdita di gravidanza correlata alla procedura e può essere sicuro nelle donne in gravidanza.
Nello studio corrente, sono stati determinati tassi di gravidanza più elevati nei gruppi di controllo e azitromicina rispetto ai gruppi di il gruppo LPS (Tabella 1). Inoltre, è stato misurato un livello di TNF-α più elevato nel gruppo LPS (Tabella 2).La risposta immunitaria materna è determinata per il successo della gravidanza. I modelli animali sono stati utilizzati per chiarire questa domanda. Il meccanismo alla base dellabbandono precoce della gravidanza è associato a diverse molecole infiammatorie; è quindi utile la modulazione dei moduli infiammatori. Uninfiammazione eccessiva può portare a esiti sfavorevoli, come laborto spontaneo e il riassorbimento fetale. Le aree di impianto sono estremamente sensibili alle citochine LPS e Th1 (TNF-α e lL-2) durante le prime fasi della gravidanza nei topi. Queste molecole hanno la capacità di indurre il riassorbimento embrionale. Basse dosi di LPS, senza influire sulla sopravvivenza della madre, causano alti tassi di riassorbimento embrionale durante le prime fasi della gravidanza. La deregolamentazione delle reti di citochine si traduce in esiti avversi della gravidanza. Le citochine Th2, inclusa IL-10, hanno un ruolo protettivo, mentre le citochine Th1, incluso TNF-α, sono fattori abortivi in gravidanza. Laumento dei livelli di TNF-α causato da LPS ha provocato una perfusione placentare insufficiente, un miglioramento degli eventi trombotici e unipossia placentare e fetale. Nello studio attuale, il trattamento LPS ha aumentato il livello di TNF-α, che ha determinato una diminuzione del tasso di gravidanza. È stato segnalato che il livello di TNF-α aumentato da LPS è strettamente legato alla recidiva interruzione della gravidanza. In un altro studio, la concentrazione della proteina legante LPS nel liquido amniotico era aumentata nei pazienti che avevano subito una perdita fetale spontanea.
In questo studio, lazitromicina ha aumentato il tasso di gravidanza di 3,5 volte rispetto alla LPS gruppo (Tabella 1). Inoltre, si è verificata una concentrazione di IL-10 più alta () nel gruppo azitromicina + LPS rispetto a quelli degli altri gruppi e il livello di TNF-α era inferiore () nel gruppo azitromicina + LPS rispetto al gruppo LPS (Tabella 2). Leritromicina e lazitromicina sono utilizzate nel trattamento delle infezioni endocervicali da clamidia e della polmonite da micoplasma nei pazienti ostetrici. Lazitromicina può essere più efficace contro le infezioni endometriali perché fornisce importanti livelli tissutali per un lungo periodo. Il passaggio transplacentare dellazitromicina è limitato e lazitromicina e altri antibiotici macrolidi sono generalmente accettati per essere sicuri in gravidanza. Laumento dei tassi di gravidanza nel gruppo azitromicina + LPS (Tabella 1) può riflettere leffetto depressivo dei macrolidi sulla produzione di citochine proinfiammatorie e leffetto di potenziamento sul livello di IL-10. Sono stati segnalati gli effetti soppressivi dei macrolidi, inclusa lazitromicina, sul livello di TNF-α e gli effetti potenzianti di questi farmaci sul livello di IL-10. Inoltre, le iniezioni di IL-10 prevengono gli aborti indotti da LPS e riducono la morte fetale indotta da LPS.
In conclusione, la perdita di gravidanza mediata da infezione o endotossiemia può essere prevenuta utilizzando azitromicina durante il periodo di gravidanza.
Conflitto di interessi
Lautore dichiara che non cè conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Lautore ringrazia il Dr. Enver YAZAR e il Dr. Ibrahim AYDIN per lassistenza scientifica.