Kivonat
A tanulmány célja annak meghatározása volt az azitromicin hatása az LPS által kiváltott terhességvesztésre. Harminchat terhes nőstény Wistar patkányt 4 egyenlő csoportba osztottunk az alábbiak szerint: kontrollcsoport, ahol 0,3 ml normál sóoldatot adtunk intravénásan a terhesség 10. napján; azitromicin-csoport, ahol az azitromicint szájon át 350 mg kg-1 dózisban adták be a terhesség 9., 10. és 11. napján; lipopoliszacharidcsoport, ahol az LPS-t intravénásán a farokvénán keresztül, 160 μg kg − 1 mennyiségben adták a terhesség 10. napján; valamint az azitromicin + LPS csoport, ahol az azitromicint szájon át, 350 mg kg-1 dózisban adták be a terhesség 9., 10. és 11. napján, az LPS-t pedig intravénásan 160 μg kg-1 dózisban a terhesség 10. napján. Vérmintákat nyertünk a farokvénából a kísérlet 10. napján. Meghatároztuk a terhességi arányokat. A tumor nekrózis faktor-alfa (TNF-a) és az interleukin (IL-10) szintjét ELISA-val mértük. Az azitromicin megakadályozta () az LPS által kiváltott terhesség elvesztését. Magasabb TNF-α és IL-10 szinteket mértünk () az LPS, illetve azitromicin + LPS csoportokban. Összefoglalva, az azitromicin hasznos lehet fertőzés- vagy endotoxémiától függő terhességvesztés esetén.
1. Bevezetés
Az anya immunrendszere képes felismerni és elutasítani a magzati antigének elleni választ. Az egyik leggyakoribb kedvezőtlen eredmény a terhesség első trimeszterében a spontán vetélés; a spontán abortusz aránya a nőknél 15–20%. Az anyai fertőzések okozta terhesség elvesztésének hátterében álló mechanizmusok azonban nem tisztázottak.
A terhességgel végzett kísérleti vizsgálatok során a gram-negatív baktériumokból származó endotoxint, a lipopoliszacharidot (LPS) alkalmazták gyulladásos válaszként. Jól ismert az abortusz és a koraszülés kiváltó okaként a gyulladásos citokinek és a nitrogén-oxid révén. A T-helper (Th2) citokinek túlnyomórészt termelődése a normális terhességre jellemző, míg a Th1 citokinek túlnyomórészt termelődése az abortuszra és a visszatérő abortuszra jellemző. Az anyai szérumban a Th2-torzításról a Th1-torzított citokinprofilra való áttérés terhes nőknél komplikációkat eredményez, például spontán abortuszokat és preeclampsia-t. tulajdonságait. Az azitromicin hasonló hatékonyságú, mint az eritromicin vagy az amoxicillin; az azitromicinnek kevesebb káros hatása van a Chlamydia trachomatis fertőzésben szenvedő terhes nők kezelésében is. Ennek a tulajdonságnak köszönhetően egyre nagyobb az azitromicin alkalmazása a komplikáció nélküli C. trachomatis fertőzésben szenvedő terhes nők kezelésében a szülészek körében. Az azitromicin klinikailag hatékony a gyakori légzőszervi, bőr / bőrszerkezeti fertőzések, nongonococcusos urethritis és C. trachomatis okozta cervicitis kezelésében. Az azitromicint a terhesség alatt a B osztályú gyógyszerek kategóriájába sorolják.
A terhesség sikere szempontjából meghatározzák az alfa tumor nekrózis faktor-alfa (TNF-α) és az interleukin (IL-10) egyensúlyát. Ha a TNF-α szintje növekszik, abortusz lép fel, míg az IL-10 támogatja a terhességet. A korai terhesség elvesztésének megfelelő megelőző kezelésének hiánya miatt feltételezték, hogy az azitromicin megakadályozhatja az LPS által kiváltott terhesség elvesztését a TNF-α gátló hatása és az IL-10 potencírozó hatása miatt.
A vizsgálat célja az volt, hogy meghatározzuk az azitromicin hatását az LPS által kiváltott terhességi veszteségre patkányokban.
2. Anyagok és módszerek
2.1. Állat
A vizsgálati protokollt a Necmettin Erbakan Egyetem, Kísérleti Orvostudományi Kutató és Alkalmazási Központ etikai bizottsága hagyta jóvá, Konya, Törökország. Harminchat nőstény és 9 hím Wistar patkányt (g, illetve g, 5-6 hónapos) használtunk ebben a vizsgálatban. A patkányokat szokásos pelletált táplálékkal etették, és csapvizet ad libitum ivóvízként biztosítottak. Az állatokat standard ketrecekben tenyésztettük 12 órás világos / sötét ciklusban, szobahőmérsékleten, páratartalmú környezetben.
2.2. Kísérleti eljárás
Az LPS-t (Escherichia coli, O111 szerotípus: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Németország) és azitromicint (Zitromax, 200 mg / 5 ml, orális szuszpenzió, Pfizer, Isztambul, Törökország) hígítottuk megfelelő koncentrációig pirogénmentes sóoldattal.
A nőstény patkányokat hímekkel 1 napig ketrecben tartották, és a hüvelyi dugó jelenlétét a terhesség 0. napjának nevezték. A patkány vemhességének tizedik és 12. napja nagyjából megfelel az emberi vemhesség első trimeszterének. A vemhes patkányokat véletlenszerűen 4 csoportba osztottuk az alábbiak szerint: kontrollcsoport, ahol 0.3 ml normál sóoldatot adtunk intravénásan a terhesség 10. napján (); azitromicin-csoport, ahol az azitromicint szájon át 350 mg kg-1 dózisban adták a terhesség 9., 10. és 11. napján (); ahol LPS csoport, az LPS-t intravénásán a farokvénán keresztül, 160 μg kg − 1 mennyiségben adták a terhesség 10. napján (); és az azitromicin + LPS csoport, ahol az azitromicint szájon át, 350 mg kg-1 dózisban adták be a terhesség 9., 10. és 11. napján, az LPS-t intravénásan 160 μg kg-1 dózisban a terhesség 10. napján (). Vérmintákat vettünk a farokvénából a kísérlet 10. napján (3 órával az LPS beadása után), és az összes állatot követtük a terhesség alatt. Ezenkívül meghatározták azokat az állatokat, amelyek születtek és nem szültek. A vizsgálat végén az összes állatot tiopental-nátrium-altatásban (70 mg / kg, intraperitoneálisan; 1 g injektált pentanátrium, I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Isztambul, Törökország) eutanizálták.
2.3. Mérések
A mintákat centrifugáltuk, és a szérum mintákat az elemzésig -70 ° C-on tároltuk. A TNF-α (eBioscience Rat TNF-α kit, érzékenység 11 pg / ml, San Diego, Kalifornia, USA) és az IL-10 (eBioscience Rat IL-10kit, érzékenység 1,5 pg / ml, San Diego, Kalifornia, USA) szintje 450 nm-en határozták meg kereskedelmi ELISA-készletek segítségével ELISA-olvasóval (MWGt Lambda Scan 200, USA).
2.4. Statisztikai elemzés
A csoportok terhességi rátáját ki-négyzet próbával értékeltük, a TNF-α és az IL-10 koncentrációit pedig összehasonlítottuk az ANOVA-val és a Tukey-próbával. Az adatokat átlag ± SE-ként fejezzük ki. Az egyes csoportok utódainak számát ANOVA és Duncan teszttel értékeltük. A jelentőséget szinten elfogadták.
3. Eredmények
Valamennyi állatot követték terhesség alatt. A patkányok átlagos súlya g volt a vemhesség előtt és g a vemhesség végén. Az azitromicin gátolta () az LPS által kiváltott terhességvesztést, és a terhességi arányra nézve nem voltak káros hatások (1. táblázat). A TNF-α szint magasabb volt () az LPS csoportban, és az IL-10 szint alacsonyabb volt () az azitromicin és a kontroll csoportban (2. táblázat). Ezenkívül az IL-10 koncentrációja az azitromicin + LPS csoportban szignifikánsan magasabb volt (), mint a többi csoport (2. táblázat). Az utódok aránya statisztikailag szignifikáns () volt az LPS csoportban az összes többi csoporthoz képest (1. ábra).
|
||||||||||||||||||||||||
| LPS: lipopoliszacharid (160 µg kg− 1 intravénásan, Escherichia coli 0111: B4). a, b Az ugyanazon oszlopban található különböző betűk statisztikailag szignifikánsak (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Megjegyzés
A vizsgálat célja az azitromicin szeptikus abortuszra gyakorolt hatásának meghatározása volt. Számos endogén anyag, például prosztaglandinok vagy citokinek, kulcsfontosságú szerepet játszanak a terhesség alatt. A visszatérő spontán abortuszt klasszikusan három vagy több terhességi veszteségként definiálják, és általában a terhesség 20 hete előtt következik be. A közelmúltban a visszatérő spontán abortuszt két vagy több klinikai terhesség spontán elvesztéseként definiálták. A terhesség káros következményei, mint például a spontán abortusz, a koraszülés, a preeclampsia és az intrauterin növekedés korlátozása a citokin-hálózatok deregulációjából származhatnak.
A jelenlegi vizsgálatban önmagában az azitromicin nem gyakorolt negatív hatást a terhességi ráta (1. táblázat). Beszámoltak arról, hogy az azitromicin profilaktikus alkalmazása csökkentheti az eljárással összefüggő terhesség elvesztését, és biztonságos lehet terhes nőknél.
A jelenlegi vizsgálatban a kontroll és az azitromicin csoportokban magasabb terhességi arányt határoztak meg, mint az LPS csoport (1. táblázat). Ezenkívül az LPS csoportban magasabb TNF-α szintet mértek (2. táblázat).Az anya immunválaszát meghatározzák a terhesség sikere szempontjából. Állatmodelleket használtak ennek a kérdésnek a tisztázására. A terhesség korai elvesztésének mechanizmusa számos gyulladásos molekulához kapcsolódik; így a gyulladásos modulok modulálása hasznos. A túlzott gyulladás kedvezőtlen eredményekhez vezethet, például spontán abortuszhoz és magzati reszorpcióhoz. Az implantáció területei rendkívül érzékenyek az LPS és a Th1 citokinekre (TNF-α és lL-2) az egerek korai vemhességében. Ezek a molekulák képesek embrionális reszorpciót kiváltani. Az LPS alacsony dózisa, anélkül, hogy befolyásolná az anya túlélését, a terhesség korai szakaszában magas embrionális felszívódást okoz. A citokin-hálózatok deregulációja káros terhességi eredményeket eredményez. A Th2 citokinek, köztük az IL-10, védő szerepet játszanak, míg a Th1 citokinek, beleértve a TNF-α-t is, abortív tényezők a terhességben. Az LPS által okozott megnövekedett TNF-α szint elégtelen placenta perfúziót, a trombotikus események javulását, valamint a placenta és a magzat hipoxiáját eredményezte. A jelenlegi vizsgálatban az LPS-kezelés növelte a TNF-α szintet, ami meghatározta a terhességi ráta csökkenését. Beszámoltak arról, hogy az LPS-ben megnövekedett TNF-α szint szorosan összefügg a visszatérő terhességvesztéssel. Egy másik vizsgálatban az LPS-kötő fehérje koncentrációja a magzatvízben nőtt azoknál a betegeknél, akiknek spontán magzati vesztesége volt.
A jelenlegi vizsgálatban az azitromicin 3,5-szeresére növelte a terhesség arányát az LPS-hez képest. csoport (1. táblázat). Ezenkívül az IL-10 koncentráció magasabb volt () az azitromicin + LPS csoportban, mint a többi csoporté, és a TNF-α szint alacsonyabb volt () az azitromicin + LPS csoportban, mint az LPS csoportban (2. táblázat). Az eritromicint és az azitromicint az endocervicalis chlamydialis fertőzések és a szülész betegek mycoplasma tüdőgyulladásának kezelésében alkalmazzák. Az azitromicin hatékonyabb lehet az endometrium fertőzései ellen, mert hosszú távon fontos szöveti szintet biztosít. Az azitromicin transzplacentáris átjutása korlátozott, és az azitromicint és más makrolid antibiotikumokat általában elfogadják a terhesség alatt. A megnövekedett terhességi arány az azitromicin + LPS csoportban (1. táblázat) tükrözheti a makrolidok depressziós hatását a gyulladásos citokinek termelésére és az IL-10 szintre gyakorolt potencírozó hatást. Beszámoltak a makrolidok, köztük az azitromicin szuppresszív hatásairól a TNF-α szintjén, és ezeknek a gyógyszereknek az IL-10 szintre gyakorolt potenciális hatásáról. Ezenkívül az IL-10 injekciók megakadályozzák az LPS által kiváltott abortuszokat és csökkentik az LPS által kiváltott magzati halálozást.
Összefoglalva elmondható, hogy a fertőzés vagy az endotoxemia által közvetített terhesség elvesztése megelőzhető az azitromicin alkalmazásával a terhesség alatt.
Érdekkonfliktus
A szerző kijelenti, hogy nincs összeférhetetlenség.
Köszönetnyilvánítás
A szerző köszönetet mond Dr. Enver YAZAR-nak és Dr. Ibrahim AYDIN-nek a tudományos segítségért.