Legendan mukaan Rooman kaupunki perustettiin vuonna 753 eKr. Tiberin rannalle, noin 25 kilometrin päässä merestä Ostiassa. Tiberin saari, joen keskellä Trasteveren ja muinaisen kaupungin keskustan välissä, oli tärkeän muinaisen kaatopaikan paikka ja silloitettiin myöhemmin. Legendan mukaan Rooman perustajat, kaksoisveljet Romulus ja Remus, hylättiin sen vesillä, missä poikasusi Lupa pelasti heidät.
Joki merkitsi etruskien maiden välistä rajaa. lännessä, sabiinit idässä ja latinalaiset etelässä: Benagn Mussolini, syntynyt Romagnassa, muutti Toscanan ja Emilia-Romagnan rajaa siten, että Tiberin lähteet asettuivat Romagnaan.
Tiber oli kriittisen tärkeä Rooman kaupalle, koska alukset pystyivät saavuttamaan jopa 100 kilometrin ylävirran; on todisteita siitä, että sitä käytettiin viljan kuljettamiseen Val Teverinasta jo 5. vuosisadalla eKr. . Sitä käytettiin myöhemmin kiven, puutavaran ja elintarvikkeiden kuljettamiseen Roomaan.
3. vuosisadalla eKr. Punaisten sotien aikana Ostian satamasta tuli keskeinen merivoimien tukikohta. Myöhemmin siitä tuli Rooman tärkein satama, jonne vehnää, oliiviöljyä ja viiniä tuotiin Rooman siirtomaisista Välimeren alueelta. Laiturit rakennettiin myös t hän joen rannalla itsessään Roomassa, reunustamalla joenrantoja Campus Martius -alueen ympärillä. Roomalaiset liittivät joen viemärijärjestelmään (Cloaca Maxima) ja maanalaiseen tunneliverkkoon ja muihin kanaviin saadakseen veden keskelle kaupunkia.
Varakkailla roomalaisilla oli puutarhapuistoja tai ”horti” joen rannalla Roomassa aina läpi ensimmäisen vuosisadan eKr. Ne on saatettu myydä ja kehittää noin vuosisataa myöhemmin.
Joen voimakas sedimentaatio vaikeutti Ostian ylläpitämistä, mikä sai keisarit Claudiuksen ja Trajanuksen perustamaan uuden sataman Fiumicinoon 1. vuosisadalla. ILMOITUS. He rakensivat uuden tien, Portuensiksen, yhdistääkseen Rooman Fiumicinoon, jättäen kaupungin Porta Portesen (”portin portin”) kautta. Molemmat satamat hylättiin lopulta lietteen takia.
Useat paavit pyrkivät parantamaan navigointia Tiberillä 1700- ja 1700-luvuilla, ja laaja ruoppaus jatkui 1800-luvulle saakka. Kauppa kasvoi jonkin aikaa, mutta 1900-luvulla liete oli johtanut siihen, että joki oli liikennöitävissä vain Roomaan asti.
Tiber tunnettiin aikoinaan tulvistaan – Campus Martius on tulva ja tulva säännöllisesti 2 metrin syvyyteen (6 ft 7 in). Joki on nyt rajattu korkeiden kivipenkkien väliin, jotka alkoivat vuonna 1876. Kaupungin sisällä joen rantoja reunustavat bulevardit, jotka tunnetaan nimellä lungoteveri, kadut ”Tiberin varrella”. , termit ”uinti Tiberissä” tai ”Tiberin ylittäminen” ovat tulleet protestanttisen lyhenteen termiksi roomalaiskatolisuuteen siirtymiselle. Tämä on yleisintä, jos käännynnäinen on ollut anglikaaninen, jonka käänteisosaa kutsutaan ”Thamesin uimiseksi” tai ”Thamesin ylittämiseksi”.
Muinaisessa Roomassa teloitettuja rikollisia heitettiin Tiber. Gemonian portailla teloitetut ihmiset heitettiin Tiberiin keisari Tiberiusin myöhemmän hallituskauden aikana. Tämä käytäntö jatkui vuosisatojen ajan. Esimerkiksi paavi Formosuksen ruumis heitettiin Tiberiin vuonna 897 pidetyn surullisen Cadaverin synodin jälkeen.