Podle legendy bylo město Řím založeno v roce 753 před naším letopočtem na břehu Tibery asi 25 kilometrů od moře v Ostii. Ostrov Tiber, uprostřed řeky mezi Trastevere a starobylým centrem města, byl místem důležitého starodávného brodu a později byl přemostěn. Legenda říká, že římští zakladatelé, dvojčata Romulus a Remus, byli opuštěni na jejích vodách, kde je zachránil vlkodlak Lupa.
Řeka označovala hranici mezi zeměmi Etrusky na západ, Sabines na východ a Latins na jih. Benito Mussolini, narozený v Romagně, upravil hranici mezi Toskánskem a Emilií-Romagnou tak, aby prameny Tibery ležely v Romagně.
Tiber byla pro římský obchod a obchod kriticky důležitá, protože lodě mohly dosáhnout až 100 kilometrů proti proudu řeky; existují důkazy, že byla používána k přepravě obilí z Val Teveriny již v 5. století před naším letopočtem . Později byl používán k přepravě kamene, dřeva a potravin do Říma.
Během punských válek ve 3. století před naším letopočtem se přístav v Ostii stal klíčovou námořní základnou. Později se stal nejdůležitější římskou základnou přístav, kde se dovážela pšenice, olivový olej a víno z římských kolonií kolem Středozemního moře. u řeky v samotném Římě, lemující břehy řek kolem oblasti Campus Martius. Římané spojili řeku s kanalizací (Cloaca Maxima) a podzemní sítí tunelů a dalších kanálů, aby se její voda dostala do středu města.
Bohatí Římané měli zahradní parky nebo „horti“ na břehu řeky v Římě až do prvního století před naším letopočtem. Ty mohly být prodány a vyvinuty asi o sto let později.
Silná sedimentace řeky znesnadňovala udržování Ostie, což vedlo císaře Claudia a Trajana k založení nového přístavu na Fiumicinu v 1. století INZERÁT. Postavili novou silnici, přes Portuensis, spojující Řím s Fiumicinem, opouštějící město Porta Portese („brána do přístavu“). Oba porty byly nakonec kvůli zanášení opuštěny.
Několik papežů se pokusilo zlepšit navigaci na Tiberu v 17. a 18. století, přičemž rozsáhlé bagrování pokračovalo až do 19. století. Obchod byl na chvíli posílen, ale zanášení 20. století vedlo k tomu, že řeka byla splavná až k samotnému Římu.
Tiber byla kdysi známá svými povodněmi – Campus Martius je niva a by pravidelně zaplavovat do hloubky 2 metry (6 ft 7 v). Řeka je nyní uzavřena mezi vysokými kamennými náspy, které byly zahájeny v roce 1876. Ve městě lemují břehy řeky bulváry známé jako lungoteveri, ulice „podél Tibery“.
Protože je řeka ztotožňována s Římem , termíny „plavání po Tiberu“ nebo „překročení Tibery“ se staly protestantským zkratkovým termínem pro konverzi na římský katolicismus. To je nejběžnější, pokud osoba, která konvertuje, byla anglikánská, jejíž zadní strana se označuje jako „plavání po Temži“ nebo „překročení Temže“.
Ve starém Římě byli popravení zločinci vrženi do Tiber. Lidé popravení na gemoniánských schodech byli v pozdější části vlády císaře Tiberia uvrženi na Tiberu. Tato praxe pokračovala po staletí. Například mrtvola papeže Formosa byla vržena do Tibery poté, co se v roce 897 konala nechvalně známá Cadaverova synoda.