Abstrakt
Cílem této studie bylo zjistit účinek azithromycinu na ztrátu těhotenství vyvolanou LPS. Třicet šest březích samic potkanů Wistar bylo rozděleno do 4 stejných skupin následovně: kontrolní skupina, kde bylo intravenózně podáno 0,3 ml fyziologického roztoku 10. den březosti; skupina s azithromycinem, kde byl azithromycin podáván orálně v dávce 350 mg kg − 1 den 9., 10. a 11. den těhotenství; skupina lipopolysacharidů, kde byl LPS podáván intravenózně ocasní žílou při 160 μg kg-1 10. den těhotenství; a skupina azithromycin + LPS, kde byl azithromycin podáván orálně v dávce 350 mg kg − 1 den 9., 10. a 11. den těhotenství a LPS byl podáván intravenózně v dávce 160 μg kg − 1 10. den těhotenství. Krevní vzorky byly získány z ocasní žíly 10. den experimentu. Byly stanoveny počty těhotenství. Hladiny faktoru alfa (TNF-a) a interleukinu (IL-10) byly měřeny pomocí ELISA. Azithromycin zabránil () ztrátě těhotenství vyvolané LPS. Vyšší hladiny TNF-a a IL-10 byly měřeny () ve skupinách LPS, respektive azithromycin + LPS. Závěrem lze říci, že azithromycin může být užitečný při ztrátě těhotenství závislé na infekci nebo endotoxemii.
1. Úvod
Mateřský imunitní systém je schopen rozpoznat a odmítnout reakci proti fetálním antigenům. Jedním z nejčastějších nepříznivých výsledků během prvního trimestru těhotenství je spontánní potrat; míra spontánního potratu je u žen 15–20%. Mechanismy ztráty těhotenství způsobené mateřskými infekcemi však nejsou jasné.
Lipopolysacharid (LPS), endotoxin odvozený od gramnegativních bakterií, byl použit k vytvoření zánětlivé odpovědi v experimentálních studiích s těhotenstvím. Je dobře známý jako spouštěč potratů a předčasného porodu prostřednictvím prozánětlivých cytokinů a oxidu dusnatého. Převládající produkce cytokinů pomocných T (Th2) je charakteristická pro normální těhotenství, zatímco převládající produkce cytokinů Th1 je charakteristická pro potrat a opakovaný potrat. Změna z profilu cytokinů ovlivněných Th2 na profil Th1 v mateřském séru vede ke komplikacím pro těhotné ženy, jako jsou spontánní potraty a preeklampsie.
Kromě přímého antimikrobiálního účinku vykazují makrolidy také protizánětlivé vlastnosti. Azithromycin má podobnou účinnost ve srovnání s erythromycinem nebo amoxicilinem; azithromycin má také méně nežádoucích účinků při léčbě těhotných žen s infekcemi Chlamydia trachomatis. Kvůli této vlastnosti se mezi porodníky zvyšuje používání azithromycinu k léčbě těhotných žen s nekomplikovanými infekcemi C. trachomatis. Azithromycin je klinicky účinný při léčbě běžných infekcí dýchacích cest, struktury kůže / kůže, nongonokokové uretritidy a cervicitidy způsobené C. trachomatis. Azithromycin je v těhotenství klasifikován jako lék třídy B.
Rovnováha mezi faktorem nekrózy nádorů alfa (TNF-α) a interleukinem (IL-10) je určena pro úspěšnost těhotenství. Kdykoli se zvyšuje hladina TNF-α, dochází k potratu, zatímco IL-10 podporuje těhotenství. Vzhledem k neexistenci adekvátní preventivní léčby časné ztráty těhotenství se předpokládá, že azithromycin může zabránit ztrátě těhotenství vyvolané LPS z důvodu inhibičního účinku na TNF-α a potenciačního účinku na IL-10.
Cílem této studie bylo zjistit účinek azithromycinu na ztrátu březosti vyvolanou LPS u potkanů.
2. Materiály a metody
2.1. Zvíře
Protokol studie byl schválen Etickou komisí Necmettin Erbakan University, Experimental Medicine, Research and Application Center, Konya, Turecko. V této studii bylo použito třicet šest samic a 9 samců krys Wistar (g, respektive 5 až 6 měsíců). Krysy byly krmeny standardní granulovanou stravou a voda z vodovodu byla poskytována ad libitum jako pitná voda. Zvířata byla chována ve standardních klecích 12hodinovým cyklem světlo / tma při teplotě místnosti v prostředí s řízenou vlhkostí.
2.2. Experimentální postup
LPS (Escherichia coli, sérotyp O111: B4, Sigma-Aldrich Chemie, Deisenhofen, Německo) a azithromycin (Zitromax, 200 mg / 5 ml, perorální suspenze, Pfizer, Istanbul, Turecko) byly naředěny s fyziologickým roztokem bez pyrogenů na vhodné koncentrace.
Krysy samic byly v klecích s muži po dobu 1 dne a přítomnost vaginální zátky byla označena jako den 0 březosti. Desátý až dvanáctý den březosti potkanů odpovídá zhruba prvnímu trimestru březosti člověka. Těhotné krysy byly náhodně rozděleny do 4 skupin následovně: kontrolní skupina, kde 0.3 ml normálního solného roztoku byly podány intravenózně 10. den těhotenství (); skupina s azithromycinem, kde byl azithromycin podáván orálně v dávce 350 mg kg − 1 den 9., 10. a 11. den těhotenství (); kde skupina LPS byla LPS podávána intravenózně ocasní žílou při 160 μg kg − 1 10. den těhotenství (); a skupina azithromycin + LPS, kde byl azithromycin podáván orálně v dávce 350 mg kg − 1 den 9., 10. a 11. den těhotenství a LPS byl podáván intravenózně v dávce 160 μg kg − 1 10. den těhotenství (). Krevní vzorky byly získány z ocasní žíly 10. den experimentu (3 hodiny po podání LPS) a všechna zvířata byla sledována během březosti. Kromě toho byla určena zvířata, která porodila a nerodila. Na konci studie byla všechna zvířata usmrcena v thiopentalní anestezii sodíkem (70 mg / kg, intraperitoneálně; Pental Sodium 1 g inj., I. E. Ulagay Ilac Sanayi, Istanbul, Turecko).
2.3. Měření
Vzorky byly centrifugovány a vzorky séra byly až do analýzy skladovány při -70 ° C. Hladiny TNF-α (eBioscience Rat TNF-α, citlivost 11 pg / ml, San Diego, CA, USA) a hladiny IL-10 (eBioscience Rat IL-10, citlivost 1,5 pg / ml, San Diego, CA, USA) byly stanoveno při 450 nm komerčními soupravami ELISA se čtečkou ELISA (MWGt Lambda Scan 200, USA).
2.4. Statistická analýza
Míra těhotenství skupin byla hodnocena pomocí chí-kvadrát testu a koncentrace TNF-a a IL-10 byly porovnány s ANOVA a Tukeyovým testem. Data jsou vyjádřena jako průměr ± SE. Počet potomků v každé skupině byl hodnocen testem ANOVA a Duncan. Význam byl přijat na úrovni.
3. Výsledky
Všechna zvířata byla sledována během březosti. Průměrná hmotnost potkanů byla g před březím a g na konci březosti. Azithromycin inhiboval () ztrátu těhotenství vyvolanou LPS a nebyly zjištěny žádné nežádoucí účinky na míru těhotenství (tabulka 1). Hladina TNF-a byla vyšší () ve skupině LPS a hladiny IL-10 byly nižší () ve skupině s azithromycinem a kontrolní skupinou (tabulka 2). Kromě toho byla koncentrace IL-10 ve skupině s azithromycinem + LPS významně vyšší () než v ostatních skupinách (tabulka 2). Míra potomstva byla statisticky významná () ve skupině LPS ve srovnání se všemi ostatními skupinami (obrázek 1).
|
||||||||||||||||||||||||
| LPS: lipopolysacharid (160 µg kg− 1 intravenózně, Escherichia coli 0111: B4). a, b Různá písmena ve stejném sloupci jsou statisticky významná (). | ||||||||||||||||||||||||
4. Komentář
Cílem této studie bylo zjistit účinek azithromycinu na septický potrat. Mnoho endogenních látek, jako jsou prostaglandiny nebo cytokiny, hraje během těhotenství klíčovou roli. Opakovaný spontánní potrat je klasicky definován jako tři nebo více ztrát těhotenství a obvykle k nim dochází před 20 týdny těhotenství. V poslední době byla opakovaná spontánní potrat nově definována jako spontánní ztráta dvou nebo více klinických těhotenství. Nežádoucí výsledky těhotenství, jako je spontánní potrat, předčasný porod, preeklampsie a omezení nitroděložního růstu, mohou být důsledkem deregulace sítí cytokinů.
V současné studii samotný azithromycin nepůsobil negativně na míra těhotenství (tabulka 1). Bylo hlášeno, že profylaktické užívání azithromycinu může snížit ztrátu těhotenství související s procedurou a může být bezpečné pro těhotné ženy.
V současné studii byla vyšší míra těhotenství stanovena u kontrolní a azithromycinové skupiny než u skupina LPS (tabulka 1). Navíc byla ve skupině LPS měřena vyšší hladina TNF-a (tabulka 2).Mateřská imunitní odpověď je určena pro úspěšnost těhotenství. K objasnění této otázky byly použity zvířecí modely. Mechanismus způsobující časnou ztrátu těhotenství je spojen s několika zánětlivými molekulami; modulace zánětlivých modulů je tedy užitečná. Nadměrný zánět může vést k nepříznivým výsledkům, jako je spontánní potrat a resorpce plodu. Oblasti implantace jsou extrémně citlivé na LPS a Th1 cytokiny (TNF-α a lL-2) během časného těhotenství u myší. Tyto molekuly mají schopnost indukovat embryonální resorpci. Nízké dávky LPS, aniž by to ovlivnilo přežití matky, způsobí vysokou míru embryonální resorpce během raného těhotenství. Deregulace sítí cytokinů vede k nepříznivým výsledkům těhotenství. Cytokiny Th2, včetně IL-10, mají ochrannou roli, zatímco Th1 cytokiny, včetně TNF-α, jsou v těhotenství potratovými faktory. Zvýšené hladiny TNF-a způsobené LPS vedly k nedostatečné perfúzi placenty, zlepšení trombotických příhod a hypoxii placenty a plodu. V současné studii léčba LPS zvýšila hladinu TNF-a, což určovalo pokles míry těhotenství. Bylo hlášeno, že hladina TNF-α se zvýšeným LPS úzce souvisí s opakovanou ztrátou těhotenství. V jiné studii byla zvýšena koncentrace proteinu vázajícího LPS v plodové vodě u pacientů, kteří měli spontánní ztrátu plodu.
V současné studii azithromycin zvýšil počet těhotenství 3,5krát ve srovnání s LPS skupina (tabulka 1). Navíc došlo k vyšší koncentraci IL-10 () ve skupině s azithromycinem + LPS než v ostatních skupinách a hladina TNF-a byla nižší () ve skupině s azithromycinem + LPS než ve skupině s LPS (tabulka 2). Erytromycin a azithromycin se používají k léčbě endocervikálních chlamydiových infekcí a mykoplazmatické pneumonie u porodníků. Azithromycin může být účinnější proti endometriálním infekcím, protože poskytuje důležité hladiny ve tkáních po dlouhou dobu. Transplacentární průchod azithromycinu je omezený a azithromycin a další makrolidová antibiotika jsou obecně považována za bezpečná v těhotenství. Zvýšené počty těhotenství ve skupině s azithromycinem + LPS (tabulka 1) mohou odrážet depresivní účinek makrolidů na produkci prozánětlivých cytokinů a potenciační účinek na hladinu IL-10. Byly hlášeny supresivní účinky makrolidů, včetně azithromycinu, na hladinu TNF-a a potencující účinky těchto léků na hladinu IL-10. Injekce IL-10 navíc zabraňují potratům indukovaným LPS a snižují smrt plodu vyvolanou LPS.
Závěrem lze říci, že ztrátě těhotenství způsobené infekcí nebo endotoxemií lze zabránit použitím azithromycinu během období těhotenství.
Střet zájmů
Autor prohlašuje, že nedochází ke střetu zájmů.
Poděkování
Autor děkuje Dr. Enveru YAZAROVI a Dr. Ibrahimu AYDINOVI za vědeckou pomoc.